Transepithelial transport of glucose and mRNA of glucose transporters in the small intestine of rats with iron-deficiency anemia

Objective: To evaluate the transepithelial transport of sodium, glucose, potassium, and water and the mRNA level of the sodium-glucose cotransporter (SGLT1) and the facilitated sugar transporter (GLUT2) in the small intestine of iron-deficient rats. Methods: After 6 wk of receiving diets with low or normal iron content, rats (Wistar-EPM) were subjected to two experiments: 1) evaluation of the transepithelial transport of sodium, glucose, potassium, and water by an ""in vivo"" experimental model of intestinal perfusion and 2) determination of relative SGLT1 and GLUT2 mRNA levels in the proximal, intermediate, and distal portions of the small intestine by the northern blotting technique. Results: Hemoglobin and hepatic iron levels were statistically lower in the anemic rats. The mean transepithelial transports of sodium (-33.0 mu Eq . min(-1) . cm(-1)), glucose (426.0 mu M . min(-1) . cm(-1)), and water (0.4 mu L . min(-1) . cm(-1)) in the small intestine of the anemic rats were significantly lower than in the control group (349.1 mu Eq . min(-1) cm(-1), 842.6 mu M . min(-1) . cm(-1), and 4.3 mu l . min(-1) cm(-1), respectively, P < 0.05). The transepithelial transport of potassium was similar for both groups. The relative SGLT1 mRNA levels of the anemic rats in the intermediate (1.796 +/- 0.659 AU) and distal (1.901 +/- 0.766 AU) segments were significantly higher than the values for the control rats (intermediate 1.262 +/- 0.450 AU, distal 1.244 +/- 0.407 AU). No significant difference was observed for the relative SLGT1 mRNA levels in the proximal segment or for the GLUT2 mRNA levels in all segments. Conclusion: Iron deficiency decreases the absorption of glucose, sodium, and water and increases SGLT1 mRNA in the intermediate and distal segments of the small intestine of rats. (C) 2011 Elsevier Inc. All rights reserved.

Effects of cyclooxygenase inhibitors on parasite burden, anemia and oxidative stress in murine Trypanosoma cruzi infection

Prostaglandins are known to be produced by macrophages when challenged with Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas` disease. It is not known whether these lipid mediators play a role in oxidative stress in host defenses against this important protozoan parasite. In this study, we demonstrated that inducible cyclooxygenase-mediated prostaglandin production is a key chemical mediator in the control of parasite burden and erythrocyte oxidative stress during T. cruzi infection in C57BL/6 and BALB/c mice, prototype hosts for the study of resistance and susceptibility in murine Chagas` disease. The results suggested the existence of at least two mechanisms of oxidative stress, dependent or independent with regard to the nitric oxide and cyclooxygenase pathway, where one or the other is more evident depending on the mouse strain.

Helicobacter pylori and Iron-deficiency Anemia in Adolescents in Brazil

Aim: The aim of the study was to evaluate the association between Helicobacter pylori infection and iron deficiency (ID) in adolescents attending a public school. Patients and Methods: From March to June 2001, a cross-sectional study was conducted among adolescents (10-16 years) enrolled in a single public school in Sao Paulo, Brazil. Of 400 eligible students, 195 agreed to participate, but 1 was excluded due to sickle cell disease. A blood sample was collected from each subject to measure hemoglobin and ferritin. H pylori status was investigated with the 13 C-urea breath test. All of the subjects with either anemia or ID were given iron therapy. Results: H pylori prevalence was 40.7% (79/194), being higher in male subjects (45/90 vs 34/104, P = 0.014). There was no relation between infection and nutritional status. Abnormally low serum ferritin was observed in 12 subjects, half of whom were positive for H pylori (odds ratio [OR] 1.49, 95% confidence interval [CI] 0.38-5.81). The median serum ferritin was 33.6 ng/mL (interquartile range 23.9-50.9) in infected subjects and 35.1 ng/mL (interquartile range 23.7-53.9) in uninfected subjects. Anemia was detected in 2% (4/194) of the students, half of whom were infected (OR 1.47, 95% CI 0.1-20.6). The mean hemoglobin value in infected subjects was 13.83 g/dL +/- 1.02 versus 14 g/dL +/- 1.06 in uninfected subjects. Conclusions: The study was not able to find a relation between H pylori infection and ID or anemia.

Content validity of visual analog scales to assess symptom severity of acute angioedema attacks in adults with hereditary angioedema : an interview study

Background: Hereditary angioedema (HAE) is a rare, debilitating, potentially life-threatening condition characterized by recurrent acute attacks of edema of the skin, face/upper airway, and gastrointestinal and urogenital tracts. During a laryngeal attack, people with HAE may be at risk of suffocation, while other attacks are often associated with intense pain, disfigurement, disability, and/or vomiting. The intensity of some symptoms is known only to the person experiencing them. Thus, interview studies are needed to explore such experience and patient-reported outcome measures (PROMs) are required for systematic assessment of symptoms in the clinical setting and in clinical trials of treatments for acute HAE attacks.

Objective: The aim of this interview study was to assess the content validity and suitability of four visual analog scale (VAS) instruments for use in clinical studies. The VAS instruments were designed to assess symptoms at abdominal, oro-facial-pharyngeal-laryngeal, peripheral, and urogenital attack locations. This is the first known study to report qualitative data about the patient's experience of the rare disorder, HAE.

Methods: Semi-structured exploratory and cognitive debriefing interviews were conducted with 27 adults with a confirmed clinical/laboratory diagnosis of HAE (baseline plasma level of functional plasma protein C1 esterase inhibitor [C1INH] <50% of normal without evidence for acquired angioedema). There were 17 participants from the US and 10 from Italy, with mean age 42.5 (SD 14.5) years, range 18–72 years, mean HAE duration 21.3 (SD 14.1) years, range 1–45 years, 67% female, and 44% VAS-naïve. Experience of acute angioedema attacks was first explored, noting spontaneous mentions by participants of HAE symptomatology. Cognitive debriefing of the VAS instruments was undertaken to assess the suitability, comprehensibility, and relevance of the VAS items. Asymptomatic participants completed the VAS instruments relevant to their angioedema experience, reporting as if they were experiencing an acute angioedema attack at the time. Interviews were conducted in the clinic setting in the US and Italy over an 8-month period.

Results: Participants mentioned spontaneously almost all aspects of acute angioedema attacks covered by the four VAS instruments, thus providing strong support for inclusion of nearly all VAS items, with no important symptoms missing. Predominant symptoms found to be associated with acute angioedema attacks were edema and pain, and there was evidence of varying degrees of disruption to everyday activities supporting the inclusion of an overall severity item reflecting the disabling effects of HAE symptoms. VAS item wording was understood by participants.

Conclusion: This interview study explored and reported the patient experience of HAE attacks. It demonstrated the content validity of the four anatomical location HAE VAS instruments and their suitability for use in clinical trials of recombinant human C1INH (rhC1INH) treatment for ascertaining trial participants' assessments of the severity of acute angioedema symptoms.

Chicken anemia virus : an understanding of the in-vitro host response over time

Chicken anemia virus (CAV) is an economically important virus affecting the chicken meat and egg industry. CAV is characterized by anemia, lymphoid depletion, and immunosuppression. Microarrays were used to investigate the response of MDCC-MSB1 cells (MSB1) to infection with CAV at 24 and 48 h post-infection (hpi). The major genes responding to CAV infection include genes involved in inflammation, apoptosis, and antiviral activity. Several cytokines were differentially regulated at either 24 or 48 hpi, including interleukin 2 (IL-2), interleukin receptors IL-1R, IL-22R, IL-18R, and IL-7R, and interferon-α (IFN-α). While there were many genes differentially regulated in this experiment, only two genes were common to both time points, suggesting a dramatic change in gene expression over the two time points studied. The present study is the first microarray experiment to investigate CAV, and we identified a number of key pathways involved in viral infection. Overall, there were more genes upregulated at 24 hpi than at 48 hpi, including genes involved in cytokine signaling, apoptosis, and antiviral activity. The two time points were vastly different in their gene expression patterns, in that at 24 hpi there were many genes involved in the response to infection, whereas at 48 hpi there were many genes associated with apoptosis and immunosuppression.

Prevalência de anticorpos contra o vírus da anemia infecciosa das galinhas em matrizes de corte na região sul do Brasil.

O vírus da anemia infecciosa das galinhas (CAV, de “chicken anemia virus”), causa doença em aves jovens, caracterizada por anemia aplástica, atrofia linfóide generalizada e conseqüente imunodepressão. A doença clínica ocorre quando os pintos são infectados durante as duas primeiras semanas de vida e pode ser evitada se as reprodutoras passarem anticorpos em quantidade suficiente para sua progênie. Após as duas semanas de idade, as aves podem se infectar com o vírus, porém não desenvolverão a doença clínica. As matrizes infectadas durante o período de reprodução não demonstram sinais clínicos, nem alterações na postura, fertilidade dos ovos e viabilidade embrionária. Após algumas semanas, desenvolvem anticorpos que irão controlar a infecção e serão passados para o ovo, protegendo total ou parcialmente a progênie durante a fase de suscetibilidade a doença. O objetivo deste trabalho foi determinar o estado imune das matrizes, através da determinação da prevalência dos anticorpos em indivíduos e lotes de matrizes, determinar em que fase da criação as matrizes se infectaram e verificar se os títulos de anticorpos das matrizes eram suficientes para proteger a sua progênie. Fizeram parte deste estudo, 20 empresas da Região Sul do País (Paraná, Santa Catarina, Rio Grande do Sul), totalizando 64 lotes de matrizes não vacinadas e 12 lotes de matrizes vacinadas contra o CAV. Foram analisados 1709 soros através de um “kit” de ELISA indireto (KPL). A criação das matrizes foi dividida em quatro fases (Recria, 1ª, 2ª e 3ª fase de produção) para a coleta das amostras e constatou-se que todos os lotes de matrizes de corte não vacinados possuíam aves com anticorpos contra o CAV, 88,86% das matrizes foram soropositivas e 52,33% destas matrizes apresentaram títulos protetores para a progênie. Isto demonstrou que a maioria das aves se infectou durante a sua vida, entretanto, 47,67% das matrizes produziram uma progênie suscetível ou parcialmente protegida. A prevalência de matrizes não vacinadas soropositivas manteve-se constante a partir da fase de recria até o pico de produção, caindo no último terço da produção. Em todas as matrizes vacinadas foram encontrados anticorpos contra o CAV com títulos protetores para a progênie.

Comparação do desempenho de frangos positivos e negativos para a presença de anticorpos contra o vírus da anemia das galinhas

O vírus da anemia das galinhas – CAV (chicken anemia virus) está presente em praticamente todos os países com produção avícola investigados, inclusive no Brasil. O CAV causa a doença chamada de anemia infecciosa das galinhas em aves jovens, que se caracteriza por anemia, aplasia de medula óssea, retardo no crescimento, mortalidade variável (2 a 20%), atrofia de órgãos linfóides e imunodepressão. O controle da anemia infecciosa das galinhas é baseado na transferência de imunidade passiva das matrizes à progênie. A transferência de anticorpos maternos via ovo em nível suficiente é uma forma de prevenir a transmissão vertical do vírus, reduzindo assim a ocorrência de surtos da doença. Este trabalho teve como objetivo comparar o desempenho entre frangos nascidos positivos e negativos para a presença de anticorpos contra o CAV. Para isso, foram utilizados dois lotes de matrizes pesadas, sendo um vacinado e o outro não. Com a progênie obtida dessas matrizes de ambos os lotes, foram constituídos três tratamentos com 50 fêmeas e 50 machos cada: T1 - pintos oriundos de matrizes vacinadas com títulos protetores; T2 - pintos oriundos de matrizes não vacinadas com títulos médios e; T3 - pintos oriundos de matrizes não vacinadas e negativas ou com títulos baixos. Todos os tratamentos permaneceram em regime de criação intensiva usual por 47 dias em 5 propriedades diferentes, portanto o experimento teve 5 repetições. Os dados analisados foram o peso inicial e final, conversão alimentar e mortalidade. Como resultado, foi observado que não houve diferença significativa (p>0,05) no peso final entre os tratamentos com relação as fêmeas. Já, nos machos, os frangos negativos (T3) foram significativamente (p<0,05) mais pesados que os frangos positivos (T1 e T2). Não houve diferença significativa (p>0,05) entre os tratamentos em relação à mortalidade e a conversão alimentar. A análise do soro e histologia do timo determinaram a não ocorrência do desafio durante o período de criação dos frangos. A vacinação das matrizes contra o CAV não gerou títulos de anticorpos superiores aos obtidos nas matrizes não vacinadas e infectadas naturalmente. Este estudo indicou que a presença de anticorpos contra o CAV em frangos de corte, seja através da vacinação ou da infecção natural das matrizes, não gerou uma progênie com melhor desempenho nas condições de criação testadas.

Estabelecimento de um protocolo de Nested-PCR para detecção do vírus da anemia das galinhas e análise filogenética de cepas brasileiras.

O vírus da anemia das galinhas (CAV) pode causar imunodepressão em galinhas de todas as idades e doença nos frangos jovens, a qual é caracterizada por severa anemia, atrofia da medula óssea e hemorragias. A doença clínica é rara hoje, porém a forma subclínica é freqüentemente encontrada em criações comerciais e resulta num considerável decréscimo do desempenho. O CAV apresenta variabilidade genética, entretanto, em relação às amostras brasileiras do CAV, pouco ou quase nada desta variabilidade é conhecida. O presente trabalho descreve um protocolo de Nested-PCR para a detecção do CAV diretamente de amostras clínicas e analisa filogeneticamente as seqüências nucleotídicas das amostras positivas buscando verificar se a patologia apresentada por estas está relacionada com a variabilidade genética. Para a extração de DNA, o método baseado em tiocianato de guanidina mostrou-se mais eficiente e prático de executar que os demais testados. Foi selecionado um par de primers que amplifica uma região de 664 pb do gene vp1 e outro par que amplifica uma região interna de 539 pb para a realização da Nested-PCR. A especificidade dos primers foi avaliada utilizando amostras de lotes controlados para CAV e 30 diferentes isolados de vírus e bactérias causadoras de doenças em galinhas, as quais não geraram produto de amplificação. A sensibilidade foi determinada a partir de diluições seriadas da vacina comercial para o CAV. A Nested-PCR mostrou ser mais sensível do que a PCR e foi capaz de detectar 0,16 DICC50% da cepa vacinal. Além disso, a Nested-PCR detectou DNA viral em tecidos, soro e cama aviária de lotes com e sem sintomas clínicos.O produto de amplificação de 539 pb do gene vp1 de 44 amostras, provenientes de diferentes Estados produtores de frangos do Brasil, foi seqüenciado e foram encontradas 10 novas seqüências nucleotídicas do CAV. Estas 10 seqüências nucleotídicas foram analisadas filogeneticamente pelo método de distância neighbour joining com 1000 replicações o qual, mostrou que não houve correlação entre a patogenia apresentada nos animais e os grupos genéticos. Estas seqüências nucleotídicas também foram comparadas com 30 cepas de CAV isoladas em outros países e não foi observada correlação entre a distribuição geográfica e a variabilidade genética. Substituições de amino ácidos foram observadas em 9 posições sendo que, 65R substituindo o resíduo Q e 98F substituindo o resíduo Y ainda não haviam sido observadas. Conclui-se que, como técnica de detecção do CAV, o protocolo de Nested-PCR aqui descrito é mais sensível e menos trabalhoso do que o isolamento viral. As amostras Brasileiras de CAV possuem características filogenéticas similares às isoladas em outros países.