Evaluación de cinco cepas de Bradyrhizobium japonicum en el rendimiento del cultivo de soya (Glycine max L. vr. "Cristalina" e "IAC-8")

Se utilizó un diseño en parcelas Divididas con arreglos en Bloques Completos al Azar en cuatro repeticiones; las parcelas grandes corresponden a la variedades y las sub- parcelas las constituían las cepas “29 W2 “SEMIA 587”, “FA 3, “US “, “USDA 110 “ y un testigo no tratado se encontró que la cepa “FA-3 mostro mayor efectividad e infectividad para las dos variedades, aunque no se encontró diferencias en los rendimientos este tratamiento presento un mayor incremento

Comportamiento de seis cepas de Bradyrhizobium japonicum en el cultivo de la soya (Glycine max (L.) Merr. var. "Cristalina")

Con el objetivo de determinar la infectividad y eficiencia de las cepas introductorias al país de Bradyrhyzobium japonicus comparándolas entre si y con so testigos uno de ellos con nitrógeno y potro no tratado, se realizó el presente trabajo en el Centro Experimental del algodón, durante los meses de agosto a diciembre de 1987. Se utilizó un diseño de bloques completos al azar con ocho tratamientos y cinco repeticiones. Los tratamiento fueron: las cepas E-45 E-97,E-104, E111, FA-3 y U8-1 y dos testigos, al primero son 80-kg/ha de nitrógeno-Urea 46% y al segundo sin nitrógeno y sin inoculante, Se determinó que la cepa FA-3 difiere significativamente de los otros tratamientos siendo éstos tanto infectivos como oficiante.

Estabelecimento de estirpes de Bradyrhizobium japonicum/ B.elkanii e seus efeitos na reinoculacao da soja em solos de cerrado.

Neste trabalho sao apresentados os resultados de um estudo para avaliar o estabelecimento de estirpes de Bradyrhizobium japonicum / B. elkanii, na resposta da soja a reinoculacao em solos de Cerrado. O experimento, que teve duracao de seis anos, foi iniciado em 1994 num Latossolo Vermelho de primeiro cultivo, isento de populacoes de rizobio capazes de nodular a soja. O delineamento experimental foi o de blocos ao acaso com tres repeticoes e a cultivar de soja utilizada foi a Doko RC. A ocupacao dos nodulos foi avaliada por tecnicas de imuno-aglutinacao. No primeiro ano do experimento (safra 1993/1994), as estirpes CPAC 7, CPAC 15, 29W e SEMIA 587 (sorogrupos CB1809, SEMIA 566, 29W e SEMIA 587, respectivamente) foram introduzidas no solo por meio da inoculacao das sementes da soja Doko RC. Tambem foi incluido um tratamento sem inoculacao, com as parcelas cultivadas com arroz. No ano seguinte (safra 1994/1995), as parcelas foram subdivididas em tres subparcelas, e a soja foi cultivada sob tres tratamentos: a) CPAC 7, b) CPAC 15 e c) sem inoculacao. No terceiro ano (safra 1995/1996), todo o experimento recebeu a soja inoculada com a estirpe CPAC 7. No quarto e no quinto anos de conducao do experimento (safras 1997/1998 e 1998/1999), a soja foi cultivada sem inoculacao. No ano agricola 1996/1997 a area foi deixada em repouso. Para os tratamentos com inoculacao foram utilizados inoculantes turfosos (8,0 x 108 celulas/g) na proporcao de 1 kg de inoculante por 50 kg de sementes. As estirpes introduzidas no solo no primeiro ano influenciaram a ocorrencia da estirpe CPAC 7 nos nodulos obtidos no terceiro ano de conducao do experimento. Nos tratamentos onde a CPAC 7 foi introduzida no primeiro ano, sua ocorrencia nos nodulos foi, em media, de 70%, enquanto nos outros tratamentos variou entre 25% e 44%. No quarto e quinto anos, quando a soja foi cultivada sem inoculacao, estirpes do sorogrupo SEMIA 566 predominaram na nodulacao (mais de 44% dos nodulos). No quinto ano do experimento, mesmo nos tratamentos onde essa estirpe jamais foi inoculada, a ocorrencia do sorogrupo SEMIA 566 foi de 74% dos nodulos, evidenciando sua elevada capacidade competitiva. Futuras estrategias para reinoculacao da soja em solos de Cerrado com as estirpes CPAC 7 e CPAC 15 deverao levar as observacoes desse estudo em consideracao.

Caracterização de rizóbios (Bradyrhizobium japonicum) e produtividade da soja

Fez-se um estudo de campo sobre a competição e a dinâmica de ocupação de sítios de nodulação de estirpes de Bradyrhizobium japonicum naturalizadas ou inoculadas em sementes. O ensaio foi instalado em Latossolo Vermelho Escuro utilizando blocos ao acaso, com 8 repetições dos seguintes tratamentos: A) controle sem inoculante; B) controle sem inoculante, com adubação nitrogenada; C) inoculante com cerca de 107 rizóbios/g (8g/kg de semente); D) inoculação com cerca de 1010 rizóbios/g (8g/kg de semente). Os inoculantes foram preparados com as estirpes recomendadas na ocasião, SMS - 314 (= SEMIA 587) e SMS - 463 (= SEMIA 5019 = 29W). A identificação das estirpes formadoras dos nódulos foi realizada em amostras coletadas aos 10, 42 e 70 dias após a germinação. Realizou-se também a colheita dos grãos para avaliação da produção e de N-total. A tipificação sorológica foi feita com antissoro preparado a partir de antígenos constituídos pelas seguintes estirpes de Bradyrhizobium japonicum: SEMIA 587, SEMIA 5019 e SEMIA 5052 (= USDA 6), utilizando-se da técnica immunodot. A caracterização das estirpes dos nódulos revelou um pequeno aumento (6,2 a 8,7%), na ocorrência de nódulos formados pelas estirpes recomendadas, nas três épocas de amostragem. Houve expressiva participação da estirpe 5052 (= sorogrupo USDA 6) na formação dos nódulos. Verificou-se que as estirpes naturalizadas podem contribuir de forma diferente na formação dos nódulos durante o ciclo, dependendo da amostragem.

Análise comparativa das seqüências de genes da ilha simbiótica entre Bradyrhizobium elkanii e Bradyrhizobium japonicum

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Doses de Bradyrhizobium japonicum e Azospirillum brasilense no desenvolvimento das plantas, na produção e na qualidade fisiológica de sementes de soja

Pós-graduação em Agronomia - FEIS

Further Studies of the Role of Cyclic β-Glucans in Symbiosis. An ndvC Mutant of Bradyrhizobium japonicum Synthesizes Cyclodecakis-(1→3)-β-Glucosyl1

The cyclic β-(1→3),β-(1→6)-d-glucan synthesis locus of Bradyrhizobium japonicum is composed of at least two genes, ndvB and ndvC. Mutation in either gene affects glucan synthesis, as well as the ability of the bacterium to establish a successful symbiotic interaction with the legume host soybean (Glycine max). B. japonicum strain AB-14 (ndvB::Tn5) does not synthesize β-glucans, and strain AB-1 (ndvC::Tn5) synthesizes a cyclic β-glucan lacking β-(1→6)-glycosidic bonds. We determined that the structure of the glucan synthesized by strain AB-1 is cyclodecakis-(1→3)-β-d-glucosyl, a cyclic β-(1→3)-linked decasaccharide in which one of the residues is substituted in the 6 position with β-laminaribiose. Cyclodecakis-(1→3)-β-d-glucosyl did not suppress the fungal β-glucan-induced plant defense response in soybean cotyledons and had much lower affinity for the putative membrane receptor protein than cyclic β-(1→3),β-(1→6)-glucans produced by wild-type B. japonicum. This is consistent with the hypothesis presented previously that the wild-type cyclic β-glucans may function as suppressors of a host defense response.

Selección de cepas de Rhizobium japonicum para la inoculación de soja en el Noroeste Argentino

p.255-261

Use of lipopolysaccharides to characterize Bradyrhizobium spp.

Three methods of extraction of lipopolysaccharide (LPS) were compared-the conventional hot phenol-water method with 40% phenol, a modified form of this method using 10% phenol, and the hot saline method. Good recovery of LPS was achieved by each of the three methods, with the LPS found in the aqueous phase with the two phenol-based procedures. The application of SDS-PAGE to the LPS extracts, followed by silver staining, showed similar banding with all three methods of extraction. When the hot saline extraction LPS fraction from eight strains of Bradyrhizobium spp. and eight strains of Bradyrhizobium japonicum was compared with SDS-PAGE, characteristic profiles were achieved. Serological analysis of eight strains of Bradyrhizobium spp., using antisera prepared against whole cells in agglutination reactions, showed extensive sharing of antigens. When antisera was prepared using outer membrane LPS, extracted by the hot saline method, the amount of cross-reaction was reduced greatly. The results indicated that LPS provide an efficient means of obtaining monospecific antisera to be used for serological identification of strains of Bradyrhizobium spp. and that the hot saline extraction method is recommended for a fast, simple and efficient way to obtain LPS and characterize this bacterium.

Short communication: Resazurin reducing time as an indicator of Bradyrhizobium viable cell count

A method based on the use of resazurin (RSZ) is described to determine the number of viable Bradyrhizobium japonicum cells in culture medium. The observation of RSZ reduction can be done spectrophotometrically or visually. B. japonicum strains behaved differently when the reducing time was considered. This methodology can be used to determine the number of viable cells during the liquid culture stage of inoculant production.

Perfil transcricional de Bradyrhizobium elkanii SEMIA 587 in vitro e em simbiose com soja (Glycine max L. Merrill) através de microarranjo de DNA

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Differential binding of peanut agglutinin with lipopolysaccharide of homologous and heterologous Rhizobium

To establish the crucial role of lipopolysaccharide in the initial recognition event of symbiotic peanut-Rhizobium system the ability of various surface polysaccharides isolated from Bradyrhizobium arachis to inhibit the precipitin reaction between peanut agglutinin and asialoganglioside: deoxycholate (1:1) micelles was estimated. It was compared with that of nonsymbiotic systems e.g. Bradyrhizobium japonicum, Bradyrhizobium ciceris and Escherichia coli. Peanut agglutinin was found to interact more strongly with the lipopolysaccharide of Bradyrhizobium arachis than the exopolysaccharide or capsular polysaccharide. The inhibitory capacity of lipopolysaccharides from homologous and heterologous Bradyrhizobium as measured in terms of the concentration necessary for 50 percent inhibition of precipitin reaction were 1428, 500, 410, and 277 times less than that of lactose for Bradyrhizobium arachis, B. japonicum, B. ciceris and Escherichia coli, respectively. These results support that host lectin peanut agglutinin can recognize homologous Bradyrhizobium lipopolysaccharide by virtue of its binding specificity of higher magnitude.

慢生型大豆根瘤菌GX201与固氮相关的putA、lrp基因的研究

该研究运用分子生物学方法，克隆并测定了慢生型大豆根瘤菌的putA、lrp基因序列，通过BLAST软件分析发现，lrp基因存在putA基因的上游且转录方向相反.将含有gus报告基因的转座子Tn5gusA5转座到以pLAFR3为载体的重组质粒pGXN300后，利用pLAFR3与pPHIJI质粒的不相容性建立了一套适合于慢生型大豆根瘤菌的转座子诱变体系，应用该体系诱变慢生型大豆根瘤菌GX201，成功地构建了putA、lrp基因的突变体GX20108和GX20120.根据已测定的慢生型大豆根瘤菌的putA、lrp基因序列，设计一对核苷酸引物，PCR扩增putA基因的调控调区，研究lrp基因与putA基因的相互作用机制，离体试验证明putA基因的启动子区存在一个与lrp基因相关蛋白结合区域.

慢生大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)聚羟丁酸合成酶基因(phbC)的克隆和序列测定

以苜蓿根瘤菌Rm10 2 1的 phaC基因突变体菌株Rm1114 4 (phaC ::Tn5 - 2 33)为受体菌 ,通过功能互补 ,成功地从构建的Bradyrhizobium japonicum USDA110基因文库中 ,筛查到能与Rm1114 4互补 ,使之恢复在以乙酰乙酸为唯一碳源的M9培养基 (M9-AA)平板上 5d形成明显可见菌落 ,以及在MOPS平板上形成粘液型菌落的表型的重组粘粒 pDC2 ;经证实 ,该粘粒带有 phbC基因 .完成了该基因的全序列测定并已在GenBank登记 ,登记号为AY0 775 80 .B .japonicumphbC基因由 180 3碱基对组成 ,GC含量 6 1.8% ,AT含量 38.2 % ;编码 6 0 0个氨基酸 ,Mr=6 6 .95× 10 3 .图 3表 3参 13