Evaluación de cinco cepas de Bradyrhizobium japonicum en el rendimiento del cultivo de soya (Glycine max L. vr. "Cristalina" e "IAC-8")

Se utilizó un diseño en parcelas Divididas con arreglos en Bloques Completos al Azar en cuatro repeticiones; las parcelas grandes corresponden a la variedades y las sub- parcelas las constituían las cepas “29 W2 “SEMIA 587”, “FA 3, “US “, “USDA 110 “ y un testigo no tratado se encontró que la cepa “FA-3 mostro mayor efectividad e infectividad para las dos variedades, aunque no se encontró diferencias en los rendimientos este tratamiento presento un mayor incremento

Comportamiento de seis cepas de Bradyrhizobium japonicum en el cultivo de la soya (Glycine max (L.) Merr. var. "Cristalina")

Con el objetivo de determinar la infectividad y eficiencia de las cepas introductorias al país de Bradyrhyzobium japonicus comparándolas entre si y con so testigos uno de ellos con nitrógeno y potro no tratado, se realizó el presente trabajo en el Centro Experimental del algodón, durante los meses de agosto a diciembre de 1987. Se utilizó un diseño de bloques completos al azar con ocho tratamientos y cinco repeticiones. Los tratamiento fueron: las cepas E-45 E-97,E-104, E111, FA-3 y U8-1 y dos testigos, al primero son 80-kg/ha de nitrógeno-Urea 46% y al segundo sin nitrógeno y sin inoculante, Se determinó que la cepa FA-3 difiere significativamente de los otros tratamientos siendo éstos tanto infectivos como oficiante.

Estabelecimento de estirpes de Bradyrhizobium japonicum/ B.elkanii e seus efeitos na reinoculacao da soja em solos de cerrado.

Neste trabalho sao apresentados os resultados de um estudo para avaliar o estabelecimento de estirpes de Bradyrhizobium japonicum / B. elkanii, na resposta da soja a reinoculacao em solos de Cerrado. O experimento, que teve duracao de seis anos, foi iniciado em 1994 num Latossolo Vermelho de primeiro cultivo, isento de populacoes de rizobio capazes de nodular a soja. O delineamento experimental foi o de blocos ao acaso com tres repeticoes e a cultivar de soja utilizada foi a Doko RC. A ocupacao dos nodulos foi avaliada por tecnicas de imuno-aglutinacao. No primeiro ano do experimento (safra 1993/1994), as estirpes CPAC 7, CPAC 15, 29W e SEMIA 587 (sorogrupos CB1809, SEMIA 566, 29W e SEMIA 587, respectivamente) foram introduzidas no solo por meio da inoculacao das sementes da soja Doko RC. Tambem foi incluido um tratamento sem inoculacao, com as parcelas cultivadas com arroz. No ano seguinte (safra 1994/1995), as parcelas foram subdivididas em tres subparcelas, e a soja foi cultivada sob tres tratamentos: a) CPAC 7, b) CPAC 15 e c) sem inoculacao. No terceiro ano (safra 1995/1996), todo o experimento recebeu a soja inoculada com a estirpe CPAC 7. No quarto e no quinto anos de conducao do experimento (safras 1997/1998 e 1998/1999), a soja foi cultivada sem inoculacao. No ano agricola 1996/1997 a area foi deixada em repouso. Para os tratamentos com inoculacao foram utilizados inoculantes turfosos (8,0 x 108 celulas/g) na proporcao de 1 kg de inoculante por 50 kg de sementes. As estirpes introduzidas no solo no primeiro ano influenciaram a ocorrencia da estirpe CPAC 7 nos nodulos obtidos no terceiro ano de conducao do experimento. Nos tratamentos onde a CPAC 7 foi introduzida no primeiro ano, sua ocorrencia nos nodulos foi, em media, de 70%, enquanto nos outros tratamentos variou entre 25% e 44%. No quarto e quinto anos, quando a soja foi cultivada sem inoculacao, estirpes do sorogrupo SEMIA 566 predominaram na nodulacao (mais de 44% dos nodulos). No quinto ano do experimento, mesmo nos tratamentos onde essa estirpe jamais foi inoculada, a ocorrencia do sorogrupo SEMIA 566 foi de 74% dos nodulos, evidenciando sua elevada capacidade competitiva. Futuras estrategias para reinoculacao da soja em solos de Cerrado com as estirpes CPAC 7 e CPAC 15 deverao levar as observacoes desse estudo em consideracao.

Novel European free-living, non-diazotrophic Bradyrhizobium isolates from contrasting soils that lack nodulation and nitrogen fixation genes - a genome comparison

The slow-growing genus Bradyrhizobium is biologically important in soils, with different representatives found to perform a range of biochemical functions including photosynthesis, induction of root nodules and symbiotic nitrogen fixation and denitrification. Consequently, the role of the genus in soil ecology and biogeochemical transformations is of agricultural and environmental significance. Some isolates of Bradyrhizobium have been shown to be non-symbiotic and do not possess the ability to form nodules. Here we present the genome and gene annotations of two such free-living Bradyrhizobium isolates, named G22 and BF49, from soils with differing long-term management regimes (grassland and bare fallow respectively) in addition to carbon metabolism analysis. These Bradyrhizobium isolates are the first to be isolated and sequenced from European soil and are the first free-living Bradyrhizobium isolates, lacking both nodulation and nitrogen fixation genes, to have their genomes sequenced and assembled from cultured samples. The G22 and BF49 genomes are distinctly different with respect to size and number of genes; the grassland isolate also contains a plasmid. There are also a number of functional differences between these isolates and other published genomes, suggesting that this ubiquitous genus is extremely heterogeneous and has roles within the community not including symbiotic nitrogen fixation.

Variabilidade de isolados de estirpes de Bradyrhizobium ssp recomendadas para a cultura da soja

A produção da soja em escala comercial tem sido viabilizada técnica e economicamente, entre outros fatores, devido a fixação biológica do N2 por estirpes de Bradyrhizobium que podem suprir a demanda de nitrogênio desta leguminosa. No entanto, a variabilidade existente nas estirpes de Bradyrhizobium spp recomendadas para inoculação da soja tem comprometido o processo simbiótico. Variantes espontâneos isolados a partir das estirpes de B. japonicum (SEMIA 5079 e SEMIA 5080) e B. elkanii (SEMIA 587 e SEMIA 5019) foram avaliados quanto ao desempenho simbiótico (eficiência, nodulação em diferentes hospedeiros e competitividade), indução de clorose foliar em diferentes hospedeiros, morfologia colonial, habilidade de metabolização de carboidratos e tolerância à salinidade em diferentes temperaturas de incubação. Nas etapas de eficiência simbiótica e competitividade foi usada a cultivar de soja BR-16 e na avaliação da nodulação e indução de clorose foliar foram usados os seguintes hospedeiros: soja (Glycine max) (cultivares Clark e Peking), caupi (Vigna unguiculata) e guandu (Cajanus cajan). A caracterização genotípica foi realizada através da reação em cadeia da polimerase (PCR), com os oligonucleotídeos iniciadores BOX A 1-R, ERIC e RP01 Os resultados obtidos demonstraram que variantes e estirpes originais diferem quanto a características fenotípicas, e que diferenças nos perfis eletroforéticos de DNA analisados através da amplificação com os oligonucleotídeos iniciadores testados, evidenciaram a variabilidade genética presente entre as estirpes originais e os variantes selecionados. A cultivar de soja Clark, assim como caupi e guandu foram susceptíveis à rizobiotoxina produzida por estirpes e variantes de B. elkanii. Embora não se tenha verificado diferenças na nodulação em diferentes hospedeiros quando variantes ou estirpes de B. japonicum e B. elkanii foram inoculados em soja, caupi e guandu, foi observado uma simbiose eficiente para a soja (cultivares BR 16, Clark e Peking). A partir da variabilidade existente nas estirpes SEMIA 587, SEMIA 5019, SEMIA 5079 e SEMIA 5080 foram selecionados variantes eficientes e competitivos quanto à fixação de N2 em soja.

Draft Genome Sequence of the Nitrogen-Fixing Symbiotic Bacterium Bradyrhizobium elkanii 587

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Polyhydroxybutyrate in Rhizobium and Bradyrhizobium: quantification and phbC gene expression

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Multidimensional cluster stability analysis from a Brazilian Bradyrhizobium sp RFLP/PCR data set

The taxonomy of the N(2)-fixing bacteria belonging to the genus Bradyrhizobium is still poorly refined, mainly due to conflicting results obtained by the analysis of the phenotypic and genotypic properties. This paper presents an application of a method aiming at the identification of possible new clusters within a Brazilian collection of 119 Bradryrhizobium strains showing phenotypic characteristics of B. japonicum and B. elkanii. The stability was studied as a function of the number of restriction enzymes used in the RFLP-PCR analysis of three ribosomal regions with three restriction enzymes per region. The method proposed here uses Clustering algorithms with distances calculated by average-linkage clustering. Introducing perturbations using sub-sampling techniques makes the stability analysis. The method showed efficacy in the grouping of the species B. japonicum and B. elkanii. Furthermore, two new clusters were clearly defined, indicating possible new species, and sub-clusters within each detected cluster. (C) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.

Caracterização de rizóbios (Bradyrhizobium japonicum) e produtividade da soja

Fez-se um estudo de campo sobre a competição e a dinâmica de ocupação de sítios de nodulação de estirpes de Bradyrhizobium japonicum naturalizadas ou inoculadas em sementes. O ensaio foi instalado em Latossolo Vermelho Escuro utilizando blocos ao acaso, com 8 repetições dos seguintes tratamentos: A) controle sem inoculante; B) controle sem inoculante, com adubação nitrogenada; C) inoculante com cerca de 107 rizóbios/g (8g/kg de semente); D) inoculação com cerca de 1010 rizóbios/g (8g/kg de semente). Os inoculantes foram preparados com as estirpes recomendadas na ocasião, SMS - 314 (= SEMIA 587) e SMS - 463 (= SEMIA 5019 = 29W). A identificação das estirpes formadoras dos nódulos foi realizada em amostras coletadas aos 10, 42 e 70 dias após a germinação. Realizou-se também a colheita dos grãos para avaliação da produção e de N-total. A tipificação sorológica foi feita com antissoro preparado a partir de antígenos constituídos pelas seguintes estirpes de Bradyrhizobium japonicum: SEMIA 587, SEMIA 5019 e SEMIA 5052 (= USDA 6), utilizando-se da técnica immunodot. A caracterização das estirpes dos nódulos revelou um pequeno aumento (6,2 a 8,7%), na ocorrência de nódulos formados pelas estirpes recomendadas, nas três épocas de amostragem. Houve expressiva participação da estirpe 5052 (= sorogrupo USDA 6) na formação dos nódulos. Verificou-se que as estirpes naturalizadas podem contribuir de forma diferente na formação dos nódulos durante o ciclo, dependendo da amostragem.

Use of lipopolysaccharides to characterize Bradyrhizobium spp.

Three methods of extraction of lipopolysaccharide (LPS) were compared-the conventional hot phenol-water method with 40% phenol, a modified form of this method using 10% phenol, and the hot saline method. Good recovery of LPS was achieved by each of the three methods, with the LPS found in the aqueous phase with the two phenol-based procedures. The application of SDS-PAGE to the LPS extracts, followed by silver staining, showed similar banding with all three methods of extraction. When the hot saline extraction LPS fraction from eight strains of Bradyrhizobium spp. and eight strains of Bradyrhizobium japonicum was compared with SDS-PAGE, characteristic profiles were achieved. Serological analysis of eight strains of Bradyrhizobium spp., using antisera prepared against whole cells in agglutination reactions, showed extensive sharing of antigens. When antisera was prepared using outer membrane LPS, extracted by the hot saline method, the amount of cross-reaction was reduced greatly. The results indicated that LPS provide an efficient means of obtaining monospecific antisera to be used for serological identification of strains of Bradyrhizobium spp. and that the hot saline extraction method is recommended for a fast, simple and efficient way to obtain LPS and characterize this bacterium.

Short communication: Resazurin reducing time as an indicator of Bradyrhizobium viable cell count

A method based on the use of resazurin (RSZ) is described to determine the number of viable Bradyrhizobium japonicum cells in culture medium. The observation of RSZ reduction can be done spectrophotometrically or visually. B. japonicum strains behaved differently when the reducing time was considered. This methodology can be used to determine the number of viable cells during the liquid culture stage of inoculant production.

Transference of a crystal protein gene from bacillus thuringiensis and its expression in bradyrhizobium sp. cells

The plasmid pHT409 that harbours the cryIA(a) gene for the production of a δ-endotoxin (crystal protein) from Bacillus thuringiensis was transferred into Bradyrhizobium sp. A conjugal transfer system aiming to introduce the plasmid into the Bradyrhizobium sp. host from colonies of an Escherichia coli donor strain (DH5α

Potencial biotecnológico de linhagens mutantes de Bradyrhizobium elkanii caracterizado por PCR quantitativo em tempo real

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)