Desenvolvimento de ferramentas moleculares para indução de tolerância imunológica em transplante

As vacinas de DNA têm sido utilizadas para a indução de imunidade contra antígenos virais e bacterianos. A aplicação de modelos experimentais tem sido explorada visando a indução de tolerância imunológica através da expressão de genes cujos produtos podem modular o sistema imune para um estado de não responsividade. A terapia gênica oferece a possibilidade de manipulação do sistema imune do receptor, através de um sistema de administração de genes específicos sob condições pré-definidas. Sua eficácia depende dos níveis de expressão e da natureza do antígeno, da via de administração assim como de sua distribuição nos tecidos (a qual às vezes depende do promotor utilizado). Porém, sua aplicação clínica é limitada em parte devido aos baixos níveis de expressão obtidos in vivo. A VP22 é uma proteína do tegumento do vírus Herpes simples tipo 1, que tem a propriedade de fazer tráfego intercelular. Estudos recentes têm demonstrado a alta eficiência desta molécula no transporte de proteínas heterólogas como VP22-p53, VP22-β galactosidase e VP22-proteína verde fluorescente. Para a indução de tolerância imunológica, tem sido demonstrado que a persistência do antígeno, pelo menos por algum período, é muito importante. Moléculas do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) têm sido utilizadas para induzir tolerância a nível central ou periférico, em diferentes protocolos. Dentre estas, as moléculas da classe I do camundongo, Kb, têm sido utilizadas com sucesso. O objetivo desse trabalho foi de construir duas vacinas recombinantes: pVP22::Kb e pCIneo::Kb. A primeira contém dois genes clonados na mesma pauta de leitura: a cadeia pesada de classe I Kb e VP22. O cDNA que codifica para o Kb foi obtido pela extração de RNA total de baço de um camundongo C57BL/6 (haplótipo H-2b) seguido de transcrição reversa. Este produto foi amplificado pela reação em cadeia da polimerase. Esta molécula também foi obtida pela amplificação direta do gene Kb previamente clonado no sítio EcoR I do plasmídeo pBluescriptIISK (Stratagene®). Ambos os produtos de PCR foram subclonados com extremidades cegas no plasmídeo pCRBluntII (Invitrogen®). Foram obtidos dezenove plasmídeos recombinantes, denominados pCRBluntII::Kb, e um deles foi escolhido e digerido com as enzimas de restrição Spe I e Xba I e defosforilado com a enzima fosfatase alcalina (CIAP). O fragmento digerido foi clonado nos plasmídeos pVP22-myc/His (Invitrogen®) e pCIneo (Promega®) previamente digeridos com a enzima Xba I. Os novos plasmídeos pVP22::Kb e pCIneo::Kb foram utilizados para transfectar a linhagem celular eucariótica CHO. A expressão do mRNA para o Kb foi confirmada pela transcrição reversa e PCR e a expressão da proteína por imunofluorescência e citometria de fluxo.

Antígenos da forma amastigota de Leishmania chagasi identificados por dupla varredura da biblioteca de cDNA

Control of human visceral leishmaniasis in endemic regions is hampered in part by the lack of knowledge with respect of the role reservoirs and vector. In addition, there is not yet an understanding of how non-symptomatic subclinical infection might influence the maintenance of infection in a particular locality. Of worrisome is the limited accessibility to medical care in places with emerging drug resistance. There is still no available protective vaccine either for humans or other reservoirs. Leishmania species are protozoa that express multiple antigens which are recognized by the vertebrate immune system. Since there is not one immunodominant epitope recognized by most hosts, strategies must be developed to optimize selection of antigens for prevention and immunodiagnosis. For this reason, we generated a cDNA library from the intracellular amastigote form of Leishmania chagasi, the causative agent of South American visceral leishmaniasis. We employed a two-step expression screen of the library to systematically identify T and T-dependent B cell antigens. The first step was aimed at identifying the largest possible number of clones producing an epitope-containing polypeptide with a pool of sera from Brazilians with documented visceral leishmaniasis. After removal of clones encoding heat shock proteins, positive clones underwent a second step screen for their ability to cause proliferation and IFN-γ responses of T cells from immune mice. Six unique clones were selected from the second screen for further analysis. The clones encoded part of the coding sequence of glutamine synthetase, transitional endoplasmic reticulum ATPase, elongation factor 1γ, kinesin K-39, repetitive protein A2, and a hypothetical conserved protein. Humans naturally infected with L. chagasi mounted both cellular and antibody responses to these protein Preparations containing multiple antigens may be optimal for immunodiagnosis and protective vaccines against Leishmania

Construção de uma biblioteca de fragmentos de anticorpos monoclonais de galinhas com cadeia única (scFv) por phage display com reatividade cruzada para estirpes heterólogas do vírus da bronquite infecciosa aviária

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Estratégias biotecnológicas para a liberação controlada de antígenos e adjuvantes em vacinas através de lipossomas

Liposomes (LP) are colloidal systems with ability to compartmentalize therapeutic molecules in order to improve biological activity, decreases the potential toxicity, and to obtain prolonged effect. In this work it was discussed the role of the various liposomes types to encapsulate drug molecules able to provoke some immunological response (drugs, antigens and DNA). The effect of the liposomes and the parameters about the formation of the structures are also analyzed. Detailed literature review shows that, depending on the molecules polarity and the superficial charge of the liposome structures, the system may be efficiently used to optimize the therapeutic effects by means of the release control or through a drug delivery mechanism.

Avaliação da reatividade cruzada entre antígenos de Leishmania spp e Trypanosoma cruzi na resposta sorológica de cães pela técnica de imunofluorescência indireta (RIFI)

Visceral Leishmaniasis (VL) is a zoonosis caused by Leishmania spp. protozoa. Dog is the main parasite's reservoir, especially in urban areas. Indirect Immunofluorescent Antibody Test (IFAT) is commonly used for canine visceral leishmaniasis (CVL) diagnosis, by detection of antibodies against the parasite. However, Trypanosoma cruzi (T.cruzi) cross reactions can occur in serological diagnosis. In order to evaluate the occurrence of cross reactions between antigens of Leishmania spp. and T.cruzi, 150 blood samples of CVL epidemiological inquiry positive dogs were collected and sera were tested by IFAT. Dogs were culled at Zoonosis Control Center of Bauru (SP), an endemic area for VL. Another 150 dogs' blood samples were collected in Botucatu (SP), a non endemic area for LV, and sera were also tested by IFAT. Serum samples of dogs from Bauru were positive, both for Leishmania spp. and for T. cruzi, showing high cross-reactions incidence, reinforcing the need of diagnosis confirmation by other tests. Serum samples of dogs from Botucatu demonstrated low prevalence of positive results by IFAT, both for Leishmania spp. and T.cruzi. However, despite the low number of positive serological results for these parasites, the epidemiological and serological investigation for LV and Chagas disease in dogs from Botucatu must be kept, considering the importance of dog as domestic reservoir for both parasites.

Proteção de bovinos contra Haemonchus placei e Haemonchus contortus após imunização com antígenos oriundos da membrana intestinal de H. contortus

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Avaliação da correlação entre aloimunização à antígenos eritrocitários e Sistema de histocompatibilidade (HLA) em pacientes com doença falciforme

Pós-graduação em Pesquisa e Desenvolvimento (Biotecnologia Médica) - FMB

Correlação entre a presença de antígenos de Leishmania sp, linfócitos T CD3+ e B CD79+ e alterações histopatológicas no tecido renal de cães com leishmaniose visceral

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Doença de Jorge Lobo e sua relação com os antígenos do sistema HLA

Pós-graduação em Doenças Tropicais - FMB

Produção de anticorpos monoclonais murinos dirigidos contra antígenos de células-tronco adulta de origem humana e de coelho

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Antígenos leucocitários humanos não-clássicos HLA-G e HLA-E em lesões benignas, pré-malignas e malignas de laringe associadas à infecção pelo Papilomavirus Humano (HPV)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Expressão dos antígenos nucleares de células em proliferação na superfície ocular de cães jovens e adultos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Expressão e análise de proteínas recombinantes de Xanthomonas axonopodis pv. citri em E. coli, visando análise estrutural por cristalografia

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Modulação da resposta imune por antígenos da parede celular de Sporothrix schenckii em modelo murino de esporotricose

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Produção de fragmentos de anticorpos monoclonais (scFv) contra isolados de campo do vírus da bronquite infecciosa das galinhas utilizando phage display

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)