L’apolipoprotéine A-I interagit avec l’adhésine impliquée dans l’adhérence diffuse (AIDA-I) d’Escherichia coli : rôle lors du processus d’adhésion et d’invasion

L’adhésine impliquée dans l’adhérence diffuse (AIDA-I) est une adhésine bactérienne présente chez certaines souches d’Escherichia coli qui, associée aux toxines Stx2e ou STb, contribue à l’apparition de la maladie de l’œdème ou de la diarrhée post-sevrage chez les porcelets. AIDA-I est un autotransporteur qui confère des capacités d’autoaggrégation, de formation de biofilms et d’adhésion. L’objectif principal du projet de recherche consistait en la recherche de récepteur(s) potentiel(s) d’AIDA-I. Les bactéries pathogènes adhèrent aux cellules-cibles soit en liant directement des molécules à la surface cellulaire ou en utilisant des molécules intermédiaires qui permettent de diminuer la distance séparant la bactérie de la cellule-cible. Puisque le sérum est un fluide qui contient de nombreuses molécules, celui-ci a été utilisé comme matériel de départ pour l’isolement de récepteur(s) potentiels. Nous avons isolé un récepteur potentiel à partir du sérum porcin : l’apolipoprotéine A-I. L’interaction entre l’apolipoprotéine A-I et AIDA-I a été confirmée par ELISA et microscopie à fluorescence. La capacité à envahir les cellules épithéliales offre aux pathogènes la possibilité d’établir une niche intracellulaire qui les protègent contre les attaques du milieu extérieur. La présente étude a démontré que la présence d’AIDA-I en tant que seul facteur de virulence chez une souche de laboratoire permet de conférer la capacité d’envahir les cellules sans promouvoir la survie intracellulaire. L’étude de la souche sauvage 2787, exprimant AIDA-I en association avec d’autres facteurs de virulence, a démontré une différence significative pour les phénotypes d’invasion et de survie intracellulaire face à la souche de laboratoire exprimant AIDA-I.

Étude et inhibition de l'adhésine impliquée dans l'adhérence diffuse (AIDA-I) d'escherichia coli

Thèse numérisée par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal

Étude de la biogenèse de l'autotransporteur AIDA-I d'Escherichia coli

Les autotransporteurs monomériques, appartenant au système de sécrétion de type V, correspondent à une famille importante de facteurs de virulence bactériens. Plusieurs fonctions, souvent essentielles pour le développement d’une infection ou pour le maintien et la survie des bactéries dans l’organisme hôte, ont été décrites pour cette famille de protéines. Malgré l’importance de ces protéines, notre connaissance de leur biogenèse et de leur mécanisme d’action demeure relativement limitée. L’autotransporteur AIDA-I, retrouvé chez diverses souches d’Escherichia coli, est un autotransporter multifonctionnel typique impliqué dans l’adhésion et l’invasion cellulaire ainsi que dans la formation de biofilm et d’agrégats bactériens. Les domaines extracellulaires d’autotransporteurs monomériques sont responsables de la fonctionnalité et possèdent pratiquement tous une structure caractéristique d’hélice β. Nous avons mené une étude de mutagenèse aléatoire avec AIDA-I afin de comprendre la base de la multifonctionnalité de cette protéine. Par cette approche, nous avons démontré que les domaines passagers de certains autotransporteurs possèdent une organisation modulaire, ce qui signifie qu’ils sont construits sous la forme de modules fonctionnels. Les domaines passagers d’autotransporteurs peuvent être clivés et relâchés dans le milieu extracellulaire. Toutefois, malgré la diversité des mécanismes de clivage existants, plusieurs protéines, telles qu’AIDA-I, sont clivées par un mécanisme qui demeure inconnu. En effectuant une renaturation in vitro d’AIDA-I, couplée avec une approche de mutagenèse dirigée, nous avons démontré que cette protéine se clive par un mécanisme autocatalytique qui implique deux acides aminés possédant un groupement carboxyle. Ces résultats ont permis la description d’un nouveau mécanisme de clivage pour la famille des autotransporteurs monomériques. Une des particularités d’AIDA-I est sa glycosylation par une heptosyltransférase spécifique nommée Aah. La glycosylation est un concept plutôt récent chez les bactéries et pour l’instant, très peu de protéines ont été décrites comme glycosylées chez E. coli. Nous avons démontré que Aah est le prototype pour une nouvelle famille de glycosyltransférases bactériennes retrouvées chez diverses espèces de protéobactéries. La glycosylation d’AIDA-I est une modification cytoplasmique et post-traductionnelle. De plus, Aah ne reconnaît pas une séquence primaire, mais plutôt un motif structural. Ces observations sont uniques chez les bactéries et permettent d’élargir nos connaissances sur la glycosylation chez les procaryotes. La glycosylation par Aah est essentielle pour la conformation d’AIDA-I et par conséquent pour sa capacité de permettre l’adhésion. Puisque plusieurs homologues d’Aah sont retrouvés à proximité d’autotransporteurs monomériques putatifs, cette famille de glycosyltranférases pourrait être importante, sinon essentielle, pour la biogenèse et/ou la fonction de nombreux autotransporteurs. En conclusion, les résultats présentés dans cette thèse apportent de nouvelles informations et permettent une meilleure compréhension de la biogenèse d’une des plus importantes familles de protéines sécrétées chez les bactéries Gram négatif.

Les bactéries exprimant AIDA-I interagissent avec l'apolipoprotéine A-I cellulaire

AIDA-I (adhesin involved in diffuse adherence) est une importante adhésine autotransporteur exprimée par certaines souches de Escherichia. coli impliquée dans la colonisation des porcelets sevrés causant la diarrhée post-sevrage et la maladie de l’œdème. Une précédente étude de notre laboratoire a identifié l’apolipoprotéine AI (ApoAI) du sérum porcin, la protéine structurale des lipoprotéines à haute densité, comme récepteur cellulaire putatif de AIDA-I. L’interaction entre ces deux protéines doit être caractérisée. Ici, nous montrons par ELISA que AIDA-I purifiée est capable d’interagir avec l’ApoAI humaine, mais également avec les apolipoprotéines B et E2. L’ApoAI est rencontrée sous deux formes, soit libre ou associée aux lipides. Nous montrons que la forme libre n’interagit pas avec les bactéries AIDA-I+ mais s’associe spécifiquement à l’ApoAI membranaire de cellules épithéliales HEp-2. Afin d’étudier le rôle de l’ApoAI dans l’adhésion des bactéries, nous avons infecté des cellules HEp-2 en présence d’anticorps dirigés contre l’ApoAI, mais l’adhésion des bactéries AIDA I+ n’a jamais été réduite. De plus, l’induction de l’expression de l’ApoAI par fénofibrate et GW7647 chez les cellules Caco 2 polarisée et Hep G2, n’a pas permis l’augmentation de l’adhésion cellulaire des E. coli exprimant AIDA-I. Notre étude suggère davantage que l’interaction entre AIDA-I et ApoAI n’intervient pas dans les mécanismes d’adhésion cellulaire.

Functional heterogeneity of the UpaH autotransporter protein from Uropathogenic Escherichia coli

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) is responsible for the majority of urinary tract infections (UTI). To cause a UTI, UPEC must adhere to the epithelial cells of the urinary tract and overcome the shear flow forces of urine. This function is mediated primarily by fimbrial adhesins, which mediate specific attachment to host cell receptors. Another group of adhesins that contributes to UPEC-mediated UTI is autotransporter (AT) proteins. AT proteins possess a range of virulence properties, such as adherence, aggregation, invasion, and biofilm formation. One recently characterized AT protein of UPEC is UpaH, a large adhesin-involved-in-diffuse-adherence (AIDA-I)-type AT protein that contributes to biofilm formation and bladder colonization. In this study we characterized a series of naturally occurring variants of UpaH. We demonstrate that extensive sequence variation exists within the passenger-encoding domain of UpaH variants from different UPEC strains. This sequence variation is associated with functional heterogeneity with respect to the ability of UpaH to mediate biofilm formation. In contrast, all of the UpaH variants examined retained a conserved ability to mediate binding to extracellular matrix (ECM) proteins. Bioinformatic analysis of the UpaH passenger domain identified a conserved region (UpaHCR) and a hydrophobic region (UpaHHR). Deletion of these domains reduced biofilm formation but not the binding to ECM proteins. Despite variation in the upaH sequence, the transcription of upaH was repressed by a conserved mechanism involving the global regulator H-NS, and mutation of the hns gene relieved this repression. Overall, our findings shed new light on the regulation and functions of the UpaH AT protein.

Autotransporters of Escherichia coli : a sequence-based characterization

Autotransporter (AT) proteins are found in all Escherichia coli pathotypes and are often associated with virulence. In this study we took advantage of the large number of available E. coli genome sequences to perform an in-depth bioinformatic analysis of AT-encoding genes. Twenty-eight E. coli genome sequences were probed using an iterative approach, which revealed a total of 215 AT-encoding sequences that represented three major groups of distinct domain architecture: (i) serine protease AT proteins, (ii) trimeric AT adhesins and (iii) AIDA-I-type AT proteins. A number of subgroups were identified within each broad category, and most subgroups contained at least one characterized AT protein; however, seven subgroups contained no previously described proteins. The AIDA-I-type AT proteins represented the largest and most diverse group, with up to 16 subgroups identified from sequence-based comparisons. Nine of the AIDA-I-type AT protein subgroups contained at least one protein that possessed functional properties associated with aggregation and/or biofilm formation, suggesting a high degree of redundancy for this phenotype. The Ag43, YfaL/EhaC, EhaB/UpaC and UpaG subgroups were found in nearly all E. coli strains. Among the remaining subgroups, there was a tendency for AT proteins to be associated with individual E. coli pathotypes, suggesting that they contribute to tissue tropism or symptoms specific to different disease outcomes.

Les autotransporteurs auto-associatifs d’Escherichia coli : de facteurs de virulence à déterminants sociaux

Les autotransporteurs monomériques représentent le système de sécrétion le plus simple et le plus utilisé chez les bactéries à Gram négatif. Les autotransporteurs monomériques sont des protéines modulaires qui contiennent toute l’information pour leur sécrétion dans leur séquence. Les phénotypes associés à l’expression d’un autotransporteur peuvent être très variés et, souvent, les autotransporteurs sont des protéines multifonctionnelles. C’est le cas notamment des autotransporteurs AIDA-I, TibA et Ag43 d’Escherichia coli qui promouvoient l’adhésion et l’invasion de cellules épithéliales, l’auto-agrégation des bactéries et la formation de biofilm. Ces trois autotransporteurs ont d’ailleurs été regroupés dans une même famille, appelée les autotransporteurs auto-associatifs (SAATs). À cause de leur fonctionnalité, les SAATs sont considérés comme étant d’importants facteurs de virulence d’Escherichia coli. Toutefois, il existe plusieurs différences entre les SAATs qui ne sont pas bien comprises, si bien que leur rôle pour les bactéries n’est toujours pas bien compris. Nous avons donc d’abord caractérisé TibA, le membre des SAATs le moins bien étudié à l’aide d’une étude structure-fonction. Nous avons observé que TibA était une protéine modulaire et que son domaine fonctionnel était composé de deux modules : un module d’auto-agrégation en N-terminal et un module d’adhésion en C-terminal. En comparant nos résultats avec ceux obtenus pour les autres SAATs, nous avons réalisé que l’organisation des trois SAATs était très variée, c’est-à-dire que les trois SAATs sont composés de modules différents. Nous avons par ailleurs observé cet arrangement en modules lorsque nous avons analysé plusieurs séquences d’aidA, suggérant qu’un mécanisme d’échange et d’acquisition de modules était à la base de l’évolution des SAATs. Sans surprise, nous avons aussi observé que la famille des SAATs ne se limitait pas à AIDA-I, TibA et Ag43 et ne se limitait pas à Escherichia coli. La comparaison a aussi révélé l’importance du phénotype d’auto-agrégation dans la fonctionnalité des SAATs. Nous avons donc entrepris une étude du mécanisme d’auto-agrégation. Nos résultats on montré que l’auto-agrégation était le résultat d’une interaction directe SAAT/SAAT et ont mis en évidence un mécanisme similaire à celui utilisé par les cadhérines eucaryotes. De plus, nous avons observé que, comme les cadhérines, les SAATs étaient impliqués dans des interactions homophiliques; un SAAT interagit donc spécifiquement avec lui-même et non avec un différent SAAT. Finalement, les SAATs font parties des quelques protéines qui sont glycosylées chez Escherichia coli. Nous avons déterminé que le rôle de la glycosylation de TibA était de stabiliser la protéine et de lui donner la flexibilité nécessaire pour moduler sa conformation et, ainsi, être pleinement fonctionnelle. Globalement, nos résultats suggèrent que les SAATs sont des molécules « cadhérines-like » qui permettent la reconnaissance de soi chez les bactéries. Une telle habilité à discriminer entre le soi et le non-soi pourrait donc être utilisée par les bactéries pour organiser les communautés bactériennes.

Experiencias creativas en medio del conflicto.

En el ámbito del Proyecto-documental CCI-Creatividad, Conflicto e Imagen, desarrollado en Colombia se dan a conocer a través de un documental, experiencias que muestran formas creativas de solucionar los conflictos y convertirlos en procesos productivos en lugar de destructivos. Se exponen, diferentes experiencias en las que la creatividad se transforma en arma de resistencia civil pacífica, en el Proyecto Raíces de Paz, en la Fundación Asperla y en la zona humanitaria Nueva Esperanza.

Antigen-43-mediated autoaggregation impairs motility in Escherichia coli

Functional interaction between bacterial surface-displayed autoaggregation proteins such as antigen 43 (Ag43) of Escherichia coli and motility organelles such as flagella has not previously been described. Here, it has been demonstrated for the first time that Ag43-mediated aggregation can inhibit bacterial motility. Ag43 overexpression produces a dominant aggregation phenotype that overrides motility in the presence of low levels of flagella. In contrast, induction of an increased flagellation state prevents Ag43-mediated aggregation. This phenomenon was observed in naturally occurring subpopulations of E coli as phase variants expressing and not expressing Ag43 revealed contrasting motility phenotypes. The effects were shown to be part of a general mechanism because other short adhesins capable of mediating autoaggregation (AIDA-I and TibA) also impaired motility. These novel insights into the function of bacterial autoaggregation proteins suggest that a balance between these two systems, i.e. autoaggregation and flagellation, influences motility.

Comparison of virulence gene profiles of Escherichia coli strains isolated from healthy and diarrheic swine

A combination of uni- and multiplex PCR assays targeting 58 virulence genes (VGs) associated with Escherichia coli strains causing intestinal and extraintestinal disease in humans and other mammals was used to analyze the VG repertoire of 23 commensal E. coli isolates from healthy pigs and 52 clinical isolates associated with porcine neonatal diarrhea (ND) and postweaning diarrhea (PWD). The relationship between the presence and absence of VGs was interrogated using three statistical methods. According to the generalized linear model, 17 of 58 VGs were found to be significant (P < 0.05) in distinguishing between commensal and clinical isolates. Nine of the 17 genes represented by iha, hlyA, aidA, east1, aah, fimH, iroN(E).(coli), traT, and saa have not been previously identified as important VGs in clinical porcine isolates in Australia. The remaining eight VGs code for fimbriae (F4, F5, F18, and F41) and toxins (STa, STh, LT, and Stx2), normally associated with porcine enterotoxigenic E. coli. Agglomerative hierarchical algorithm analysis grouped E. coli strains into subclusters based primarily on their serogroup. Multivariate analyses of clonal relationships based on the 17 VGs were collapsed into two-dimensional space by principal coordinate analysis. PWD clones were distributed in two quadrants, separated from ND and commensal clones, which tended to cluster within one quadrant. Clonal subclusters within quadrants were highly correlated with serogroups. These methods of analysis provide different perspectives in our attempts to understand how commensal and clinical porcine enterotoxigenic E. coli strains have evolved and are engaged in the dynamic process of losing or acquiring VGs within the pig population.

Integració a la plataforma webDTI de tècniques de clustering de fibres i visualització de clústers

Estudi, disseny i implementació de diferents tècniques d’agrupament de fibres (clustering) per tal d’integrar a la plataforma DTIWeb diferents algorismes de clustering i tècniques de visualització de clústers de fibres de forma que faciliti la interpretació de dades de DTI als especialistes

Rondaies de Menorca I. 'Cuentos de Menorca I'.

La recopilación de rondalles menorquines es una de las primeras que se realizó en 1914 por parte del maestro de la escuela nacional de Es Migjorn Gran de Menorca. Las narraciones que se presentan surgen de un trabajo de investigación en las fuentes orales de las gentes del campo que se habían ido explicando de padres a hijos. Las narraciones recopiladas se presentan totalmente contextualizadas en los territorios, costumbres, modismos y personajes de la isla. Esta característica no excluye que narraciones muy similares se hayan recogido en otros lugares cercanos o en otras culturas lejanas, perfectamente adaptadas a la realidad circundante. Es asombroso comprobar la similitud entre las narraciones menorquinas y las narraciones mallorquinas, excepto en la descripción de los ambientes, culturas, modismos y personajes de cada isla. El primer tomo incluye: En Pere sa fava; Sa Cabreta; Es Falconet; Es vei Matei i es vei Tirorilúlo; S'aufabia de sa ventura; S'aida; N'Espardanyeta; En Pere de S'aigo; En Bon-Jesús i Sant Pere; Ses tres paraules de la Reina, En Pere d'es fabiol i Sa cabra i es cabrit.

I Shall Show you my island, you will show me your country. 'Yo te mostraré mi isla y tu me mostrarás tu país'.

El proyecto arranca de una idea central que consiste en programar todas las clases de inglés que correspondan a los dos ciclos de la ESO, partiendo de dos realidades culturales, como son: -la isla en la que vive el alumno con sus implicaciones en la región 'I shall show you my island'. -El lugar donde se habla la lengua, objeto de aprendizaje (inglés) 'You will show me your country'. El grupo de trabajo está compuesto por 19 docentes tanto de EGB como de bachillerato, y pertenecen a la isla de La Palma todos ellos. El objetivo general que se propone es lograr desarrollar las capacidades de los alumnos en los ámbitos cognitivos, afectivos y sociales tomando como base para su logro las vivencias que el medio en que se desarrollan les son consustanciales con su propia vida. Desde un principio se propuso llevar a cabo una unidad didáctica conectada al 'proyecto general', de tal manera que fuese coherente y siguiese una línea general y espiral con el resto de las once unidades restantes que forman en su conjunto todo el proyecto de enseñanza de la ESO. La unidad didáctica como un 'todo' organizado no se ha llevado a la práctica este curso, sin embargo a medida que se iba elaborando material, se iba investigando en el aula. Además de la aportación de la asesora de inglés, este trabajo se ha apoyado en: libros de texto, revistas pedagógicas, material de reprografía, medios informáticos, etc. En cuanto a la valoración del proyecto ha sido muy positiva tanto por el propio grupo de trabajo como por el público asistente a las Jornadas de Innovación celebradas en La Palma y donde pudo presentarse la experiencia..

A internacionalização de empresas pela AIDA para os PALOP e/ou Brasil-Ceará

O presente trabalho tem como propósito responder a questão "qual o interesse estratégico de empresas do distrito de Aveiro se internacionalizarem para os Países Africanos de Língua Oficial Portuguesa (PALOP) e/ ou Brasil - Ceará?". O objeto de estudo surgiu após a integração num estágio curricular na AIDA - Associação Industrial do Distrito de Aveiro - e levou à revisão da literatura dos temas estratégia e internacionalização, assim como ao trabalho de campo (6 entrevistas a colaboradoras da AIDA), proporcionando as componentes conceptual e empírica. Verificou-se que o setor de atividade é fundamental para o sucesso das empresas nas missões. Designadamente, bastantes empresas ligadas ao setor metalomecânico, que tendem a recorrer a estes mercados dos PALOP e/ ou Brasil - Ceará, alcançaram, em muitos casos, o sucesso - isto é, a concretização de negócios com novos clientes e / ou o investimento direto nesses países. O contributo do presente trabalho reside também na perspetiva, resultante de um inquérito desenvolido no âmbito do estágio no Gabinete de Relações Exteriores da AIDA, de que ainda que se verifique uma janela de oportunidade para algumas das empresas nos referidos mercados (PALOP e Brasil - Ceará), entende-se que, para o sucesso efetivo destas empresas, outras formas de empreender poderiam ser colocadas em prática, nomeadamente alianças estratégicas entre pequenas e médias empresas (PME) de setores semelhantes, a nível local (Portugal), para competirem a nível internacional com os respetivos líderes de mercado. Desta forma, sugere-se lutar pela competitividade não só nos PALOP mas também nos mercados desenvolvidos, tais como Alemanha, Estados Unidos da América e/ ou países escandinavos - pois somente com clientes exigentes e com a pressão de concorrentes fortes poder-se-ão criar indústrias desenvolvidas e capazes de competir ao mais elevado nível e pelos melhores clientes, com poder de compra e fontes de inovação (Porter, 1990). Estas lições parecem, por ezes, esquecidas, mas segundo Gibbs (2007) um dos propósitos da investigação é também o de lembrar o que foi esquecido e/ ou ignorado. As entrevistas realizadas ofereceram contributo na medida em que proporcionam a compreensão dos motivos para as empresas portuguesas escolherem estes mercados, das razões para o sucesso ou insucesso nos PALOP e/ ou Brasil - Ceará, do investimento e esforço por parte das entidades não-governamentais portuguesas em internacionalizar empresas do setor da metalomecânica, das forças e fraquezas das missões empresariais, de que aspetos fazem da AIDA um agente de mudança e das áreas em que poderia haver maior diligência por parte da AIDA.São também sugeridas recomendações a associação, entre outras, a inclusão das questões culturais de cada país nos estudos de mercado não só sobre PALOP e Brasil - Ceará, mas também nos estudos de mercado do distrito de Aveiro, assim como de Portugal, para fazer divulgação a potenciais importadores; melhoria de processos, implementando-se um software de gestão/ partilha de conhecimento das várias oportunidades de negócio, rentabilizando o processo de estabelecimento de interesse em realizar negócio, no âmbito do EEN (Entelprise Eumpe Netwrk); intervenção na plataforma do IAPMEI por informáticos habilitados; e armazenamento de dados em cloud storage - um serviço do género da Dropbox, de modo a rentabilizar o tempo dispendido, assim como a tornar as pastas acedidas via intranet mais pequenas.