Modula����o da express��o da prote��na XPA em resposta ao tratamento com azul de metileno fotossensibilizado

Reactive oxygen species (ROS) are produced by aerobic metabolism and react with biomolecules, such as lipids, proteins and DNA. In high concentration, they lead to oxidative stress. Among ROS, singlet oxygen (1O2) is one of the main ROS involved in oxidative stress and is one of the most reactive forms of molecular oxygen. The exposure of some dyes, such as methylene blue (MB) to light (MB+VL), is able to generate 1O2 and it is the principle involved in photodynamic therapy (PDT). 1O2 e other ROS have caused toxic and carcinogenic effects and have been associated with ageing, neurodegenerative diseases and cancer. Oxidative DNA damage is mainly repaired by base excision repair (BER) pathway. However, recent studies have observed the involvement of nucleotide excision repair (NER) factors in the repair of this type of injury. One of these factors is the Xeroderma Pigmentosum Complementation Group A (XPA) protein, which acts with other proteins in DNA damage recognition and in the recruitment of other repair factors. Moreover, oxidative agents such as 1O2 can induce gene expression. In this context, this study aimed at evaluating the response of XPA-deficient cells after treatment with photosensitized MB. For this purpose, we analyzed the cell viability and occurrence of oxidative DNA damage in cells lines proficient and deficient in XPA after treatment with MB+VL, and evaluated the expression of this enzyme in proficient and complemented cells. Our results indicate an increased resistance to treatment of complemented cells and a higher level of oxidative damage in the deficient cell lines. Furthermore, the treatment was able to modulate the XPA expression up to 24 hours later. These results indicate a direct evidence for the involvement of NER enzymes in the repair of oxidative damage. Besides, a better understanding of the effects of PDT on the induction of gene expression could be provided

Identifica����o de genes MUTM em BACs da cana-de-a��ucar e caracteriza����o preliminar destes genes e seus promotores

Sugarcane has an importance in Brazil due to sugar and biofuel production. Considering this aspect, there is basic research being done in order to understand its physiology to improve production. The aim of this research is the Base Excision Repair pathway, in special the enzyme MUTM DNA-glycosylase (formamidopyrimidine) which recognizes oxidized guanine in DNA. The sugarcane scMUTM genes were analyzed using four BACs (Bacterial Artificial Chromosome) from a sugarcane genomic library from R570 cultivar. The resulted showed the presence in the region that had homology to scMUTM the presence of transposable elements. Comparing the similarity, it was observed a highest similarity to Sorghum bicolor sequence, both nucleotide and peptide sequences. Furthermore, promoter regions from MUTM genes in some grass showed different cis-regulatory elements, among which, most were related to oxidative stress, suggesting a gene regulation by oxidative stress

Identifica����o de genes em Chromobacterium violaceum relacionados �� resposta ao estresse

The sequencing of the genome of Chromobacterium violaceum identified one single circular chromosome of 4.8 Mb, in which approximately 40% of the founded ORFs are classified as hypothetical conserved or hypothetical. Some genic regions of biotechnological and biological interest had been characterized, e. g., environmental detoxification and DNA repair genes, respectively. Given this fact, the aim of this work was to identify genes of C. violaceum related to stress response, as the ones involved with mechanisms of DNA repair and/or genomic integrity maintenance. For this, a genomic library of C. violaceum was built in Escherichia coli strain DH10B (RecA-), in which clones were tested to UVC resistance, resulting in five candidates clones. In the PLH6A clone were identified four ORFs (CV_3721 to 3724). Two ORFs, CV_3722 and CV_3724, were subcloned and a synergic complementation activity was observed. The occurrence of an operon was confirmed using cDNA from C. violaceum in a RT-PCR assay. Further, it was observed the induction of the operon after the treatment with UVC. Thus, this operon was related to the stress response in C. violaceum. The mutagenesis assay with rifampicin after the treatment with UVC light showed high frequency of mutagenicity for the ORF CV_3722 (Pol III �� subunit). In this way, we propose that the C. violaceum �� subunit can act in DH10B in the translesion synthesis using Pol IV in a RecA independent-manner pathway. In growth curve assays other four clones (PLE1G, PLE7B, PLE10B and PLE12H) were able to complement the function at the dose 5 J/m2 and in mutagenicity assays PLE7B, PLE10B and PLE12H showed frequencies of mutation with significant differences upon the control (DH10B), demonstrating that in some way they are involved with the stress response in C. violaceum. These clones appear to be interrelated, probably regulated by a messenger molecule (eg., nucleotide c-di-GMP) and/or global regulatory molecule (eg., ��S subunit of RNA polymerase).The results obtained contribute for a better genetic knowledge of this specie and its response mechanisms to environmental stress.

An��lise da estabilidade gen��tica de c��lulas-tronco mesenquimais humanas

Human multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs), also known as mesenchymal stem cells, have become an important and attractive therapeutic tool since they are easily isolated and cultured, have in vitro expansion potential, substantial plasticity and secrete bioactive molecules that exert trophic effects. The human umbilical cord as a cell source for cell therapy will help to avoid several ethical, political, religious and technical issues. One of the main issues with SC lines from different sources, mainly those of embryonic origin, is the possibility of chromosomal alterations and genomic instability during in vitro expansion. Cells isolated from one umbilical cord exhibited a rare balanced paracentric inversion, likely a cytogenetic constitutional alteration, karyotype: 46,XY,inv(3)(p13p25~26). Important genes related to cancer predisposition and others involved in DNA repair are located in 3p25~26. Titanium is an excellent biomaterial for bone-implant integration; however, the use can result in the generation of particulate debris that can accumulate in the tissues adjacent to the prosthesis, in the local bone marrow, in the lymph nodes, liver and spleen. Subsequently may elicit important biological responses that aren��t well studied. In this work, we have studied the genetic stability of MSC isolated from the umbilical cord vein during in vitro expansion, after the cryopreservation, and under different concentrations and time of exposition to titanium microparticles. Cells were isolated, in vitro expanded, demonstrated capacity for osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation and were evaluated using flow cytometry, so they met the minimum requirements for characterization as MSCs. The cells were expanded under different concentrations and time of exposition to titanium microparticles. The genetic stability of MSCs was assessed by cytogenetic analysis, fluorescence in situ hybridization (FISH) and analysis of micronucleus and other nuclear alterations (CBMN). The cells were able to internalize the titanium microparticles, but MSCs preserve their morphology, differentiation capacity and surface marker expression profiles. Furthermore, there was an increase in the genomic instability after long time of in vitro expansion, and this instability was greater when cells were exposed to high doses of titanium microparticles that induced oxidative stress. It is necessary always assess the risks/ benefits of using titanium in tissue therapy involving MSCs, considering the biosafety of the use of bone regeneration using titanium and MSCs. Even without using titanium, it is important that the therapeutic use of such cells is based on analyzes that ensure quality, security and cellular stability, with the standardization of quality control programs appropriate. In conclusion, it is suggested that cytogenetic analysis, FISH analysis and the micronucleus and other nuclear alterations are carried out in CTMH before implanting in a patient

Estudo do papel da prote��na multifuncional APE1/Ref-1 sobre a resposta inflamat��ria na meningite bacteriana

Despite advances in antibiotic therapy, bacterial meningitis (BM) remains with high mortality and morbidity rates in worldwide. One important mechanism associated to sequels during disease is the intense inflammatory response which promotes an oxidative burst and release of reactive oxygen species, consequently leading to cell death. Activation of DNA repair enzymes during oxidative stress has been demonstrated in several neurological disorders. APE1/Ref-1 is a multifunctional protein involved in DNA repair and plays a redox function on transcription factors such as NFkB and AP-1.The aim of this study was assess the role of APE1/Ref-1 on inflammatory response and the possibility of its modulation to reduce the sequels of the disease. Firstly it was performed an assay to measure cytokine in cerebrospinal fluid of patients with BM due to Streptococcus pneumoniae and Neisseriae meningitides. Further, a cellular model of inflammation was used to observe the effect of the inhibition of the endonuclease and redox activity of APE1/Ref-1 on cytokine levels. Additionally, APE1/Ref-1 expression in cortex and hippocampus of rat with MB after vitamin B6 treatment was evaluated. Altogether, results showed a similar profile of cytokines in the cerebrospinal fluid of patients from both pathogens, although IFNy showed higher expression in patients with BM caused by S. pneumoniae. On the other hand, inhibitors of APE1/Ref-1 reduced cytokine levels, mainly TNF-��. Reduction of oxidative stress markers was also observed after introduction of inhibitors in the LPS-stimulated cell. In the animal model, BM increased the expression of the protein APE1/Ref-1, while vitamin B6 promoted reduction. Thereby, this data rise important factors to be considered in pathogenesis of BM, e.g., IFNy can be used as prognostic factor during corticosteroid therapy, APE1/Ref-1 can be an important target to modulate the level of inflammation and VIII oxidative stress, and vitamin B6 seems modulates several proteins related to cell death. So, this study highlights a new understanding on the role of APE1/Ref-1 on the inflammation and the oxidative stress during inflammation condition

Contribui����o para a elabora����o de um sistema de gest��o ambiental dos diques de manuten����o e reparo do Arsenal de Marinha do Rio de Janeiro

A Ba��a de Guanabara, ambiente de localiza����o do Arsenal de Marinha do Rio de Janeiro (AMRJ), sofre com a intensa press��o antr��pica, principalmente no aspecto da qualidade das ��guas. Neste contexto, uma fra����o consider��vel da polui����o decorre das atividades dos estaleiros, uma vez que a atividade industrial naval no Rio de Janeiro n��o tem mecanismo de controle de polui����o �� altura do seu real potencial poluidor. Esta aus��ncia de fiscaliza����o possibilita o lan��amento na Ba��a de res��duos s��lidos, esgotos sanit��rios, efluentes qu��micos, oleosos e t��xicos, tornando crescente a contamina����o dessas ��guas, margens e mangues. Estes descartes cada vez mais s��o alvo das exig��ncias ambientais da sociedade e das legisla����es. Devido a isto, a gest��o de efluentes l��quidos do Arsenal tornou-se priorit��ria, para tal, esse estudo foi proposto, tendo iniciado pela an��lise das oficinas do estaleiro, na qual as opera����es no dique foram identificadas como uma das mais impactantes do estaleiro. A partir desta constata����o, est��o apresentadas duas fontes de pesquisas para a redu����o dos impactos. Na primeira etapa, h�� o estudo das atividades geradoras de efluentes no dique de reparo, com os objetivos de propor a implanta����o das diretrizes de melhores pr��ticas de gest��o, de minimizar a gera����o de efluentes l��quidos e de contribuir para a ado����o de pr��ticas ambientais proativas. Como segunda pesquisa, com base nas tecnologias mundiais, h�� a proposta de tratamento dos efluentes de um dique, na qual foram identificados os processos que ir��o atender ��s necessidades ambientais do estaleiro, com as op����es de escolha entre o tratamento parcial, para o descarte na rede p��blica, ou com o prosseguimento do processo at�� o seu re��so. As conclus��es deste estudo apontam para a implanta����o da gest��o ambiental do dique sistematizada, rigorosa e integrada com a gest��o das embarca����es, acrescentando-se a isto, as necessidades de incorpora����o de tecnologias modernas e de sistema de tratamento dos efluentes, propiciando de maneira sustent��vel que haja a continua����o do processo de produ����o do estaleiro e, ao mesmo tempo, permitindo o retorno da biodiversidade da Ba��a de Guanabara.

Efeitos da aplica����o t��pica da S-Nitrosoglutationa no reparo tecidual de les��es cut��neas isqu��micas

A aplica����o t��pica do hidrogel Pluronic F-127 (poli(��xido de etileno)99-poli(��xido de propileno)65-poli(��xido de etileno)99, PEO99-PPO65-PEO99) contendo um doador de ��xido n��trico, a S-nitrosoglutationa (GSNO) �� conhecida por exercer efeitos ben��ficos no reparo tecidual cut��neo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da aplica����o t��pica do hidrogel Pulronic F-127 contendo um doador de ��xido n��trico no reparo tecidual de les��es isqu��micas. Ratos Wistar machos foram submetidos a duas les��es incisionais paralelas no dorso, a pele foi separada do tecido subjacente, as incis��es foram suturadas e uma les��o excisional foi feita entre elas para criar uma condi����o isqu��mica ao redor da les��o. Os animais foram separados em grupo controle, que recebeu a aplica����o apenas do hidrogel sem doador de ��xido n��trico e grupo tratado, que recebeu a aplica����o do hidrogel contendo o doador de ��xido n��trico. Os animais foram tratados por 7 dias consecutivos com uma aplica����o di��ria dos hidrog��is. O grupo tratado apresentou taxas mais altas de contra����o e re-epiteliza����o, menor quantidade de c��lulas inflamat��rias, um aumento na densidade e organiza����o de fibras col��genas e uma diminui����o na neovasculariza����o 14 dias ap��s a les��o, comparado ao grupo controle. Esses resultados indicam que a aplica����o t��pica do gel doador de ��xido n��trico �� eficaz no tratamento de les��es isqu��micas em ratos, levando a uma melhora significativa na cicatriza����o. Consequentemente, a aplica����o t��pica de um hidrogel contendo doador de ��xido n��trico poder�� ter, futuramente, potencial para o tratamento terap��utico de ��lceras venosas e decorrentes de diabetes.

Desenvolvimento e valida����o de sistema multiplex X-STR para identifica����o humana por DNA

Novas metodologias de an��lise molecular voltadas para estudos populacionais, cl��nicos, evolutivos, da biodiversidade e identifica����o forense foram desenvolvidas com base em marcadores micross��telites ou STR Short Tandem Repeats. Os marcadores STR, que est��o amplamente espalhados nos genomas e se caracterizam por apresentar alto grau de polimorfismo, podem ser analisados a partir da amplifica����o por PCR (Rea����o em Cadeia da polimerase). A an��lise foi facilitada a partir do desenvolvimento de sistemas de amplifica����o simult��nea de m��ltiplos STR (multiplex STR) e com a detec����o automatizada dos produtos de amplifica����o marcados por fluoresc��ncia. Recentemente, o uso de marcadores STR do cromossomo X (X-STR) tornou-se significativo na pr��tica forense. Devido ao seu modo de transmiss��o, os X-STR s��o ��teis em situa����es particulares de investiga����o de rela����es de parentesco, apresentando vantagens sobre o uso de STR autoss��micos. Este estudo teve como principal objetivo o desenvolvimento e valida����o de sistema multiplex, denominado LDD (X-STR) Decaplex, capaz de amplificar dez loci X-STR (DXS7133, DXS7424, DXS8378, DXS6807, DXS7132, DXS10074, DXS7423, DXS8377, GATA172D05 e DXS10101) para aplica����o em gen��tica populacional, identifica����o e an��lises forenses. Utilizando o LDD (X-STR) Decaplex 170 indiv��duos autodenominados afrodescendentes, n��o aparentados geneticamente, foram genotipados. As freq����ncias al��licas e genot��picas n��o apresentaram desvio do equil��brio de Hardy-Weinberg e est��o em concord��ncia com aquelas observadas em outros estudos. Os hapl��tipos observados foram ��nicos em indiv��duos de amostra masculina. A an��lise de desequil��brio de liga����o n��o revelou associa����o entre os marcadores X-STR. A diversidade gen��tica foi elevada, variando entre 0,6218 para o locus DXS7133 a 0,9327 para o locus DXS8377. Os par��metros de Probabilidade de Vincula����o (PV), ��ndice de Vincula����o (IV), Poder de Exclus��o (PE), Poder de Discrimina����o e Raz��o de Verossimilhan��a foram tamb��m elevados, demonstraram que os dez X-STRs s��o altamente polim��rficos e discriminativos na popula����o estudada. A concentra����o m��nima de DNA para a amplifica����o dos loci do LDD (X-STR) Decaplex �� de 0,5 ng e verificamos que amplifica����o por PCR pode ser afetada quando s��o adicionados mais de 5 ng de DNA nas rea����es. Os percentuais de bandas stutter foram elevados para os loci DXS7132 e DXS8377. No teste de reprodutibilidade observamos consist��ncia entre as tipagem de diferentes amostras biol��gicas, incluindo as de restos mortais. No teste de mistura a propor����o limite em que observamos a coexist��ncia de duas esp��cies biol��gicas foi de 2,5:1ng (feminino-masculino). Os resultados evidenciaram que os loci do LDD (X-STR) Decaplex s��o altamente informativos, consistindo, em conjunto, uma ferramenta importante em estudos de identifica����o humana e de rela����es de parentesco.

Avalia����o da suscetibilidade antimicrobiana e do perfil de macrorrestri����o do DNA de isolados humanos de Salmonella serovar Typhimurium fagotipo 193, no per��odo de 1970 a 2008

Para analisar cepas de Salmonella ser. Typhimurium isoladas de processos ent��ricos e extraintestinais humanos ocorridos no per��odo de 1970 a 2008 de diferentes regi��es do pa��s foram selecionadas, com base nos registros contidos no banco de dados do Laborat��rio de Enterobact��rias do IOC/FIOCRUZ, RJ, amostras do fagotipo prevalente 193, visando precipuamente o reconhecimento de clones epid��micos. Foram selecionadas 553 cepas de Salmonella ser. Typhimurium fagotipo 193 representadas por 91, 65, 70 e 327 amostras referentes as d��cadas de 70, 80, 90 e ao per��odo de 2000 a 2008, respectivamente. Na an��lise global da sensibilidade destas cepas, 52% apresentaram um ou mais marcadores de resist��ncia a antibi��ticos inclu��dos no perfil ACSSuT. Este perfil de resist��ncia completo foi verificado em 20,9% dos isolados, sendo os 21,9% restantes, sens��veis a todas as drogas testadas, especialmente no per��odo de 2000 a 2008, representadas por 121 amostras (37,0%) em rela����o as 327 culturas dessa ��poca. O maior percentual de resist��ncia foi observado nas amostras da d��cada de 70 (99%) sendo o perfil ACSSuT detectado em 35,2% dos isolados, ressaltando-se que todas as amostras foram isoladas de processos gastroent��ricos ocorridos na cidade de S��o Paulo. Ao longo das quatro d��cadas de estudo, descreve-se um ponto de ruptura entre a preval��ncia de resist��ncia e a suscetibilidade na transi����o entre as d��cadas de 80 e 90. Embora o n��mero de isolados de Salmonella ser. Typhimurium fagotipo 193 tenha aumentado no ��ltimo per��odo considerado, o percentual de mono e multirresist��ncia aos antimicrobianos se situou em n��vel elevado (63,0%). A an��lise do polimorfismo obtido ap��s macrorrestri����o com a enzima XbaI revelou que cepas isoladas na d��cada de 90 apresentaram elevado percentual de similaridade (≥85%) com cepas isoladas recentemente (per��odo de 2000-2008), sendo agrupadas nos mesmos subclusters. Por outro lado, as cepas da d��cada de 70 inserem-se em subclusters independentes, embora o percentual de similaridade entre tais subclusters e os demais seja ≥70%; o mesmo sendo observado para as cepas isoladas durante a d��cada de 80. Em conclus��o, este estudo mostrou que a preval��ncia de isolados humanos de Salmonella ser. Typhimurium fagotipo 193 no Brasil vem progredindo desde a d��cada de 1990, enquanto a detec����o do modelo R (ACSSuT) est�� diminuindo e a avalia����o atrav��s da PFGE indicou a presen��a de multiplicidade de perfis de macrorrestri����o no fagotipo 193, entretanto com elevados percentuais de similaridade entre si, sugerindo alguma clonalidade, tendo em vista o per��odo entre o isolamento e a an��lise

Efeitos da suplementa����o com diferentes ��leos comest��veis durante o reparo tecidual cut��neo

��cidos graxos s��o mol��culas bioativas end��genas e ex��genas, que podem ser potentes mediadores e/ou reguladores de muitos processos celulares, no entanto, os seus efeitos no reparo de les��es cut��neas n��o est��o bem esclarecidos. O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos da suplementa����o com diferentes ��leos comest��veis na cicatriza����o de les��es cut��neas. Para isso, ratos Wistar machos (6-8 semanas/ 150200g) foram separados em quatro grupos: Um grupo controle (n=7) e tr��s grupos experimentais (n=21). Trinta dias antes de realizarmos a les��o no dorso de cada animal, demos in��cio a suplementa����o di��ria pelo m��todo de gavagem com 1,5ml/kg de ��leo de girassol, linha��a ou peixe e esta se manteve at�� o dia da eutan��sia (d14). Em d0 uma les��o excional (1cm) foi realizada na parte dorsal de cada animal. A contra����o da les��o e re-epiteliza����o foram medidas em d0, d7 e d14. Ao sacrificarmos os animais a les��o foi coletada juntamente com pele normal adjacente. O fechamento da les��o foi significativamente maior no grupo de controle (��rea lesada 58&#61617;2%) em d7, quando comparado com os outros grupos (grupo girassol 68&#61617;2%, linha��a 772% e peixe 732%) com p<0,05, para todos. Em d14 observamos menor ��rea lesada no grupo controle (��rea lesada 211%) em rela����o aos grupos suplementados com ��leo de linha��a e peixe (��rea lesada dos grupos linha��a 271% e peixe 271%), com p<0,05 para ambos os grupos. N��o observamos diferen��a no fechamento da les��o quando comparamos os grupos controle (��rea lesada 211%) e girassol (��rea lesada 251%). Em rela����o ao infiltrado inflamat��rio observamos uma quantidade moderada nos grupos controle, linha��a e peixe, enquanto que no grupo girassol foram encontradas poucas c��lulas inflamat��rias. Grande n��mero de miofibroblastos foi observado nos grupos controle e girassol na regi��o superficial do tecido de granula����o. Entretanto, nos grupos linha��a e peixe observamos poucos miofibroblastos e muitos vasos sangu��neos dilatados. Os grupos controle e girassol apresentaram vasos sangu��neos oclu��dos e concentrados na regi��o profunda do tecido de granula����o. Os grupos controle e girassol apresentaram densidade moderada de fibras col��genas na regi��o profunda do tecido de granula����o. Esse resultado foi confirmado atrav��s da dosagem de hidroxiprolina. Os n��veis de hidroxiprolina estavam menores nos grupos controle e girassol quando comparados com os grupos linha��a e peixe. A suplementa����o com diferentes tipos de ��leos comest��veis retarda o processo de contra����o da les��o e afeta o infiltrado inflamat��rio e a deposi����o de fibras col��genas

Utiliza����o de sistema multiplex de marcadores do tipo INDELs em identifica����o humana por DNA

Os INDELs s��o polimorfismos de comprimento, gerados a partir de inser����es e/ou dele����es de um ou mais nucleot��deos. Os marcadores INDELs, que est��o amplamente distribu��dos pelo genoma e se caracterizam pela alta estabilidade devido �� baixa taxa mutacional (10-9), podem ser analisados a partir da amplifica����o por PCR (Rea����o em Cadeia da Polimerase). A facilidade de an��lise e a possibilidade de constru����o de sistemas multiplex capazes de gerar amplicons curtos (menores que 100 pb) tornam os INDELs uma importante ferramenta para identifica����o humana por DNA. Para avaliar a efici��ncia e validar a metodologia que emprega os polimorfismos de inser����o/dele����o na identifica����o humana, utilizamos o sistema Indel-plex ID, capaz de amplificar simultaneamente 38 loci INDELs bial��licos de cromossomos autossomos. Diferentes amostras biol��gicas (cabelo, saliva, sangue, s��men e urina) foram genotipadas apresentando reprodutibilidade entre todas as tipagens. A concentra����o m��nima de DNA necess��ria para amplifica����o dos 38 loci INDELs foi de 0,5 ng. Artefatos do tipo split peaks foram observados em algumas amostras. Os produtos da PCR foram purificados em resina Sephadex proporcionando melhores condi����es de an��lise, redu����o de artefatos e aumento na intensidade m��dia de fluoresc��ncia dos alelos amplificados. A efici��ncia do sistema Indel-plex ID na amplifica����o de DNA degradado foi verificada durante as an��lises das amostras de DNA extra��das de restos mortais (ossos e dentes). Comparativamente ao sistema Identifiler, o Indel-plex ID, se mostrou mais eficiente em termos de n��mero de loci genotipados e qualidade de amplifica����o. Nas investiga����es de v��nculos gen��ticos realizadas com o sistema Indel-plex ID foi poss��vel corroborar resultados anteriores obtidos pela an��lise de marcadores STR. Nas an��lises com amostras in vivo foram obtidos valores m��ximos de Probabilidades de Paternidade de 99,99998%. Para casos envolvendo supostos pais falecidos, o sistema Indel-plex ID refor��ou resultados obtidos com o sistema Identifiler e Minifiler. A Probabilidade de Paternidade de 99,953%, obtida com o sistema Indel-plex ID, conjugada com a Probabilidade de Paternidade de 99,957%, obtida como o sistema Minifiler, possibilitou um ��ndice final de 99,99998%. Os resultados evidenciaram que os loci INDELs do sistema Indel-plex ID s��o altamente informativos, constituindo uma ferramenta importante em estudos de identifica����o humana e de rela����es de parentesco

Participa����o do propranolol no reparo tecidual de les��es isqu��micas cut��neas em ratos

Receptores adren��rgicos s��o amplamente expressos em diferentes tecidos, incluindo na pele. Recentemente foi descoberto que bloqueadores dos receptores &#946;-adren��rgicos s��o capazes de modular o processo de reparo tecidual. O propranolol �� um &#946;-bloqueador n��o seletivo largamente utilizado na pr��tica cl��nica para o tratamento de doen��as cardiovasculares, parecendo apresentar propriedades antioxidantes. O objetivo desse estudo foi avaliar a resposta de diferentes doses de propranolol durante a les��o isqu��mica cut��nea em roedores. Ratos Wistar foram tratados com propranolol nas concentra����es de 3 e 6 mg/kg. O grupo controle recebeu apenas o ve��culo e o grupo controle positivo recebeu vitamina E (50 mg/kg/dia). A administra����o do propranolol iniciou-se no dia da les��o, sendo realizada diariamente at�� o sacrif��cio. Incis��es bilaterais foram feitas no dorso de cada animal. O flap foi suturado e foram realizadas les��es excisionais totais entre as les��es incisionais. A contra����o das les��es foi avaliada e os cortes histol��gicos foram corados com hematoxilina e eosina e vermelho de picrosirius. Foram utilizadas tamb��m as seguintes t��cnicas: Dopplerfluxometria, an��lises bioqu��micas, an��lise estereol��gica e express��o de PECAM-1. O grupo tratado com 3 mg de propranolol apresentou uma maior redu����o na ��rea total da les��o quando comparado ao grupo controle. Da mesma forma, este grupo apresentou um aumento na densidade de vasos sangu��neos, uma maior express��o de PECAM-1 e aumento na perfus��o sangu��nea na pele isqu��mica e no s��tio da les��o quando comparado ao grupo controle. N��o observamos efeito antioxidante do propranolol neste modelo. Em resumo, n��s sugerimos que o propranolol quando administrado na dose de 3 mg/kg/dia foi capaz de modular a angiog��nese e melhorar o fechamento da les��o em modelo de roedores

Estudo da ancestralidade materna da popula����o do Rio de Janeiro: an��lise do DNA mitocondrial

As por����es uniparentais do genoma humano, representadas pelo cromossomo Y e pelo DNA mitocondrial (DNAmt), cont��m informa����o gen��tica relacionada ��s heran��as patrilinear e matrilinear, respectivamente. Al��m da aplicabilidade em gen��tica m��dica e forense, o DNAmt tem sido utilizado como um importante marcador molecular em estudos sobre evolu����o para tra��ar infer��ncias filogen��ticas e filogeogr��ficas sobre as popula����es humanas. A an��lise de linhagens de DNAmt presentes em diferentes popula����es mundiais levou �� identifica����o de haplogrupos reunindo diversos hapl��tipos espec��ficos dos grandes grupos ��tnicos: africanos, europeus, asi��ticos e nativos americanos. A popula����o brasileira �� conhecida como uma das mais heterog��neas do mundo, resultado do processo de coloniza����o do pa��s, abrangendo mais de cinco s��culos de miscigena����o entre povos de diferentes continentes. Este trabalho teve como objetivo estimar a partir da an��lise do DNA mitocondrial as propor����es ancestrais africanas, europ��ias e amer��ndias na popula����o do Rio de Janeiro. Para isso foram sequencidas as regi��es hipervari��veis HVI e HVII do DNAmt de 109 indiv��duos n��o relacionados geneticamente residentes no Rio de Janeiro. Os haplogrupos foram classificados de acordo com o conjunto de polimorfismos dos hapl��tipos individuais. Programas estat��sticas foram utilizados para a determina����o de par��metros de diversidade gen��tica e compara����es populacionais. A diversidade haplot��pica foi estimada em 0,9988. Nossos resultados demonstraram na popula����o do Rio de Janeiro percentuais de cerca de 60%, 25% e 15% de ancestralidades maternas africana, amer��ndia e europ��ia, respectivamente. Atrav��s da an��lise de dist��ncias gen��ticas, evidenciou-se que a popula����o do Rio de Janeiro est�� mais pr��xima das popula����es brasilerias dos estados de S��o Paulo e Alagoas. Como descrito nos registros hist��ricos, algumas regi��es do pa��s tiveram processos de coloniza����o muito espec��ficos que se refletem nas propor����es ancestrais maternas e paternas observadas. Em rela����o ao DNAmt, n��o se verificou diferen��a gen��tica significativa entre as popula����es do Rio de Janeiro e a de Angola, uma popula����o africana. Os resultados obtidos est��o em estreita concord��ncia com os registros hist��ricos e outros estudos gen��ticos acerca da forma����o da popula����o brasileira

Avalia����o da aspirina e do ��cido cafeico fenetil estersobre o reparo tecidual cut��neo

Numerosos modelos in vitro e in vivo foram desenvolvidos para estudar o reparo de les��es e identificar os mecanismos chave deste processo. Visando avaliar o processo de cicatriza����o utilizamos um modelo de les��o excisional total e um modelo de queimadura promovida por escaldamento. No estudo utilizando o modelo de les��o excisional total, abordamos o uso da aspirina (um inibidor n��o seletivo da COX) e seu efeito diferenciado sobre os sexos na cicatriza����o cut��nea de camundongos. Observamos que os grupos f��mea controle e tratado apresentaram contra����o atrasada comparado aos grupos macho controle e tratado, respectivamente. Entre os grupos f��mea e macho controles, as f��meas apresentaram menor atividade da mieloperoxidase e menor quantidade de c��lulas MIF-positivas do que os machos controle. J�� entre os grupos f��mea e macho tratados, foi observado que nas f��meas tratadas, a atividade da mieloperoxidase e a quantidade de macr��fagos F4/80-positivos estavam maiores do que no grupo macho tratado. Ainda entre os grupos tratados, as f��meas apresentaram menores n��veis de hidroxiprolina e maior express��o proteica de vWF e VEGF comparado aos machos. No estudo das les��es causadas por queimadura, avaliamos as propriedades anti- inflamat��rias e antioxidantes do ��cido cafeico fenetil ester (CAPE) no reparo destas les��es e observamos que em 7, 14, 21 e 70 dias ap��s a queimadura, o grupo queimado+CAPE apresentou menor ��rea lesada, al��m de menor atividade da mieloperoxidase e dos n��veis de nitrito do que o grupo queimado. Tamb��m foi observado que no grupo queimado+CAPE a express��o proteica de CD68 e de PECAM-1 estava reduzida comparada ao grupo queimado. Analisando os par��metros de dano oxidativo foi observado que os n��veis de MDA e de prote��nas carboniladas estavam menores no grupo queimado+CAPE do que no grupo queimado, tanto no plasma quanto na les��o. Em suma, nosso estudo avaliou o processo de cicatriza����o de dois modelos de les��o, em roedores de diferentes esp��cies e em abordagens distintas. No modelo de les��o excisional total em camundongos observamos que a administra����o da aspirina prejudicou o processo de cicatriza����o em camundongos Balb/c f��meas, mas n��o afetou esse processo nos machos da mesma linhagem, o que pode ser explicado pela redu����o dos n��veis de estr��genos nas f��meas. A utiliza����o do CAPE na cicatriza����o de queimaduras em ratas comprovou sua efic��cia anti-inflamat��ria e antioxidante devido ao grupo queimado+CAPE ter apresentado maior taxa de cicatriza����o, redu����o da resposta inflamat��ria, al��m da redu����o do dano oxidativo em lip��deos e prote��nas comparado ao grupo queimado.

Altera����es no reparo tecidual cut��neo em um modelo de resist��ncia �� insulina

A obesidade associada ��s altera����es metab��licas, tais como a resit��ncia �� insulina, provoca significativas modifica����es no decorrer do processo de cicatriza����o. O objetivo desse estudo foi inicialmente avaliar os efeitos da resist��ncia �� insulina induzida por uma dieta com elevado teor de gordura durante o reparo tecidual. E, em seguida, investigar o papel dos macr��fagos neste processo. Observamos que os animais submetidos �� dieta hiperlip��dica (RHL) tornaram-se intolerantes �� glicose e resistentes �� insulina, al��m de aumentarem as taxas plasm��ticas de colesterol e triglicer��deos em rela����o aos animais alimentados com ra����o padr��o (RP). O grupo RHL apresentou uma menor taxa de contra����o da les��o e reepiteliza����o em rela����o ao grupo RP. Observamos ainda maior quantidade de c��lulas inflamat��rias (c��lulas NOS 2-positivas, macr��fagos, e neutr��filos), menor densidade de fibras do sistema col��geno e maior densidade de miofibroblastos e vasos sangu��neos no grupo RHL. O dano oxidativo estava maior no grupo RHL bem como a express��o proteica do fator de crescimento transformante-&#946;1 (TGF-&#946;1) e &#945;-actina de m��sculo liso (&#945;-SMA). O grupo RHL apresentou altos n��veis plasm��ticos de TNF-&#945; quando comparado com o grupo RP. Al��m disso, a propor����o das c��lulas M1 (macr��fagos ativados classicamente) e M2 (macr��fagos ativados alternativamente) foi a mesma em ambos os grupos. Em rela����o a s��ntese e libera����o de citocinas e fatores de crescimento avaliados atrav��s dos ensaios in vitro, observamos ainda que os n��veis do fator de necrose tumoral-&#945; (TNF-&#945;) e interleucina-1&#946; (IL-1&#946;) estavam maiores no meio condicionado de macr��fagos isolados dos animais do grupo RHL (MCRHL) em relac��o ao meio condicionado de macr��fagos isolados dos animais do grupo RP (MCRP). Al��m disso, os nossos resultados demonstraram claramente que os fatores sol��veis produzidos por macr��fagos isolados a partir de animais resistentes �� insulina inibem a prolifera����o e a migra����o de fibroblastos. Atrav��s desses resultados podemos mostrar que a resist��ncia �� insulina retarda o processo de cicatriza����o e sugerir os macr��fagos participam deste retardo.