Estudo in vitro da infectividade de espécies de Leishmania do subgênero Viannia em macrófagos peritoneais de camundongo BALB/c

Os parasitos do gênero Leishmania apresentam variações de infectividade intra e inter específicas. Entretanto, são escassas as informações a respeito da infectividade das espécies de Leishmania do Novo Mundo, principalmente, daquelas encontradas na região Amazônica brasileira, onde, até o presente momento são conhecidas seis espécies pertencentes ao subgênero Viannia causadoras de LTA. Diante disso, o objetivo do presente trabalho foi investigar, in vitro, o comportamento da infectividade de 5 espécies de Leishmania do subgênero Viannia em macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c e sua correlação com a produção de óxido nítrico pelos macrófagos infectados. Trinta cepas de Leishmania foram distribuídas em seis grupos iguais, de acordo com as espécies seguintes: I- L. (V) braziliensis/LCL, II- L. (V) braziliensis/LCM, III- L. (V) guyanensis, IV- L. (V) shawi, V -L. (V) naiffi e VI- L. (V) lainsoni. As cepas foram cultivadas em meio RPMI suplementado com 10% de soro bovino fetal e 1% de penicilina-gentamicina, até atingir a fase estacionária de cultivo, quando foram usadas para infectar macrófagos na proporção de 4 parasitos/macrófago. As culturas foram incubadas a 35°C e 5% de CO2 e após 24h, as lamínulas foram coradas com Giemsa para contagem do número de parasitos e determinação do índice de infecção, enquanto a concentração de NO (nitrito) foi calculada pelo método de Griess. Observou-se que as cepas de L. (V) braziliensis/LCM apresentaram o maior índice de infecção (385), sendo este significativamente maior (P<0,005) que as cepas de L. (V) braziliensis/LCL (264), L. (V) naiffi (215) e L. (V) lainsoni (272), porém, não significativamente maior que os índices das espécies L. (V) shawi (292) e L. (V) guyanensis (300). Quanto aos níveis de NO (nitrito), detectou-se maior concentração para a espécie L. (V) naiffi (4,1µM e menor concentração para as cepas de L. (V) braziliensis/LCM (2,15µM). As demais espécies tiveram concentrações de: L. (v:) lainsom (3,14µM), L. (V) shawi (2,96µM), L. (V) guyanensis (2,76µM) e cepas de L. (V) braziliensis/LCL (3,1µM). Diante do exposto, concluímos que cepas de L. (V) braziliensis/LCM são mais infectivas do que as demais espécies estudadas e, também, mais infectivas que cepas homólogas isoladas de casos clínicos de LCL. Além disso, observou-se menor infectividade da espécie L. (V) naiffi. Desse modo, notou-se que os níveis de NO produzidos pelos macrófagos infectados foram inversamente proporcionais ao grau do parasitismo.

Estudo epidemiológico, genotípico e fenotípico de estirpes de Staphylococcus aureus produtoras de biofilmes isoladas do ambiente de ordenha e de casos de mastite bovina

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Epidemiologia molecular aplicada ao monitoramaento de estirpes de Staphylococcus aureus envolvidas em casos de mastite bovina

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Estudo do microcultivo in vitro para o isolamento de Leishmania sp no estado do Pará

Os parasitas do gênero Leishmania apresentam uma variabilidade de espécies na região Amazônica e para sua correta identificação é necessário o isolamento dos mesmos. Atualmente para o isolamento do parasita e posterior diagnóstico da doença têm se utilizado a técnica de microcultivo in vitro. O objetivo de nosso trabalho foi otimizar a técnica de microcultivo in vitro para o isolamento de Leishmania sp. Para o isolamento, além do microcultivo, foi analisado a técnica de vácuo-aspiração adaptada e a viabilidade do parasita a temperaturas abaixo de 25ºC. No total foram utilizados 18 hamsters, infectados com amostras de casos clínicos de Leishmaniose tegumentar americana, sendo 3 de Leishmania.(Leishmania) amazonensis e 2 de Leishmania.(Viannia) braziliensis o qual foram realizados 56 cultivos por vácuo-aspiração em meio NNN, 12 em microtubos e 23 por microcapilares com RPMI suplementado, mantidos entre 25º e 31ºC. Para a segunda etapa, participaram 7 pacientes, totalizando 6 culturas por vácuo-aspiração e 42 por microcapilares. Conservou-se a baixa temperatura 7 tubos com NNN que foram mantidas a 5ºC. Foi observado que os isolamentos por vácuo-aspiração de amostras de L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis em hamsters foram sensíveis a adaptação da técnica, diferente das amostras de pacientes. A positividade variou entre 2 a 8 dias e 4 e 5 dias respectivamente. Os microtubos apresentaram positividade para as mesmas amostras de hamsters no período de 5 a 8 dias. Para as amostras dos pacientes, 2/12 tubos por vácuo-aspiração foram positivos e para isolamento em microcapilares 6/42, valores inferiores aos encontrados na literatura. A amostras conservadas a 5ºC apresentaram viabilidade até o 30º dia. Com estes resultados foi observado que o microcultivo é viável para uso dentro de nossa região, entretanto se mostrou limitado para o isolamento de amostras provenientes de pacientes. Devem-se utilizar outros meios de cultivo, de modo a observar o comportamento do parasito e também aperfeiçoar a coleta do material da lesão a fim de melhorar os resultados de isolamento.

Epidemiologia molecular aplicada ao estudo da mastite caprina causada por Staphylococcus spp

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Estudo morfofisiométrico de ovários e maturação ovocitária in vitro em bubalinos e bovinos nas diferentes fases da atividade reprodutiva

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Análise químico-farmacêutica e estudo de estabilidade e de dissolução de cápsulas de flucloxacilina sódica

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Identificação de Enterococcus spp. e avaliação da ocorrência de genes de resistência á vancomicina em amostras de pacientes de hospitais de manaus, AM

Pós-graduação em Fisiopatologia em Clínica Médica - FMB

Produção de anticorpos monoclonal murino dirigido contra a PBP2a do S. aureus resistente a meticilina

Pós-graduação em Pesquisa e Desenvolvimento (Biotecnologia Médica) - FMB

Beta-lactamase detection in Staphylococcus aureus and coagulase-negative Staphylococcus isolated from bovine mastitis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

The seasonal and ovarian status effects on in vitro production of domestic cat embryos between Equator and Tropic of Capricorn

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Biotechnology of polyketides: new breath of life for the novel antibiotic genetic pathways discovery through metagenomics

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Development and Validation of A Stability-Indicating Mekc Method for Determination of Flucloxacillin Sodium in Capsules

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Fibrinogen-Induced Streptococcus mutans Biofilm Formation and Adherence to Endothelial Cells

Streptococcus mutans, the predominant bacterial species associated with dental caries, can enter the bloodstream and cause infective endocarditis. The aim of this study was to investigate S. mutans biofilm formation and adherence to endothelial cells induced by human fibrinogen. The putative mechanism by which biofilm formation is induced as well as the impact of fibrinogen on S. mutans resistance to penicillin was also evaluated. Bovine plasma dose dependently induced biofilm formation by S. mutans. Of the various plasma proteins tested, only fibrinogen promoted the formation of biofilm in a dose-dependent manner. Scanning electron microscopy observations revealed the presence of complex aggregates of bacterial cells firmly attached to the polystyrene support. S. mutans in biofilms induced by the presence of fibrinogen was markedly resistant to the bactericidal effect of penicillin. Fibrinogen also significantly increased the adherence of S. mutans to endothelial cells. Neither S. mutans cells nor culture supernatants converted fibrinogen into fibrin. However, fibrinogen is specifically bound to the cell surface of S. mutans and may act as a bridging molecule to mediate biofilm formation. In conclusion, our study identified a new mechanism promoting S. mutans biofilm formation and adherence to endothelial cells which may contribute to infective endocarditis.

Screening of wild type Streptomyces isolates able to overproduce clavulanic acid

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)