5 resultados para Cromatografia líquida de alta resolução (HPLC)
em Repositório Digital da UNIVERSIDADE DA MADEIRA - Portugal
Resumo:
O polimorfismo dos genes HLA-A, HLA-B e HLA-DRB1 foi estudado em trs populaes Portuguesas (Portugal continental, Madeira e Aores) e em duas Africanas (Guin-Bissau e Cabo Verde). Os dados em alta resolução, obtidos por sequenciao (SBT), foram comparados com a caracterizao efectuada pelo mtodo SSOP revelando 4,6% de incongruncias entre os resultados destes dois mtodos. Os alelos mais frequentes em cada um dos loci foram: HLA-A*0201 em todas as populaes (13,5-26%); HLA-B*5101 em Portugal continental (12%, o mesmo para o B*440301), Madeira (9,7%) e Aores (9,8%) e B*350101 na Guin-Bissau (14,4%) e Cabo Verde (13,2%); HLADRB1*0701 em Portugal continental (15%), Madeira (15,7%) e Aores (18,3%), DRB1*1304 na Guin-Bissau (19,6%) e DRB1*110101 em Cabo Verde (10,1%). Os haplotipos 3-loci mais predominantes em cada populao foram: A*020101-B*440301-DRB1*070101 em Portugal continental (3,1%), A*020101-B*510101- DRB1*130101 na Madeira (2,7%), A*2902-B*4403-DRB1*0701 nos Aores (2,4%), A*2301-B*1503-DRB1*110101 na Guin-Bissau (4,6%) e A*3002-B*350101-DRB1*1001 em Cabo Verde (2,8%). O presente trabalho revela que a populao continental Portuguesa tem sido influenciada geneticamente por Europeus e Norte Africanos devido a vrias imigraes histricas. O Norte de Portugal parece concentrar, provavelmente devido presso da expanso rabe, um antigo pool gentico originado pela influncia milenar de Europeus e Norte Africanos. Os dados obtidos nos genes do sistema HLA corroboram as fontes histricas que confirmam que o povoamento dos Aores teve o contributo de outros Europeus, essencialmente Flamengos, para alm dos Portugueses. As frequncias allicas e haplotpicas neste arquiplago no apresentam uma distribuio homognea entre as ilhas do grupo Oriental e Central. O grupo Central revela uma influncia clara daEuropa Central e uma muito menor afinidade a Portugal continental. As frequncias allicas e haplotpicas mostram que a ilha da Madeira foi povoada por Europeus, a maioria Portugueses, mas tambm por sub-Saharianos devido ao comrcio de escravos. Cabo Verde no uma populao tipicamente sub-Sahariana pois revela uma importante influncia gentica Europeia, para alm da base gentica Africana. A anlise dos haplotipos e dendrogramas mostram uma influncia gentica Caucasiana no actual pool gentico Cabo-Verdiano. Os dendrogramas e a anlise das coordenadas principais mostram que os Guineenses so mais semelhantes aos Norte Africanos do que qualquer outra populao sub-Sahariana j estudada ao nvel do sistema HLA, provavelmente devido a contactos histricos com outros povos, nomeadamente rabes do Este Africano e Berberes.
Resumo:
A presena de aminas biognicas em alimentos um ponto crtico da segurana alimentar dada a sua implicao em fenmenos de intoxicaes alimentares. Com a realizao deste trabalho pretendeu-se contribuir para um melhor esclarecimento desta temtica, actuando-se a dois nveis: numa primeira fase procedeu-se ao desenvolvimento e validao de uma nova metodologia analtica para a determinao simultnea de quatro aminas biognicas (histamina, cadaverina, tiramina e triptamina) presentes no pescado; numa segunda fase procedeu-se quantificao dos teores das aminas biognicas em amostras de tundeos. O desenvolvimento da metodologia quantitativa baseou-se na utilizao da tcnica de cromatografia líquida acoplada espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS), tendo a preparao dos extractos para anlise envolvido a extraco das aminas biognicas do msculo de tundeos com cido clordrico e a purificao dos extractos obtidos por SPE. Como qualquer outro mtodo cromatogrfico, a metodologia de LC-MS/MS desenvolvida exigiu a optimizao de vrios parmetros como: a concentrao do padro interno, a metodologia de extraco em fase slida (SPE), composio e fluxo da fase mvel, volume de injeco, determinao dos tempos de reteno, condies de ionizao e condies de fragmentao. A validao metodologia foi realizada atravs da avaliao de alguns parmetros analticos, tal como o ajuste do modelo de calibrao, preciso (repetibilidade e preciso intermdia), limite de quantificao, limite de deteco e percentagem de recuperao. De modo a potenciar a sensibilidade e selectividade permitida pelo equipamento analtico e com o objectivo de efectuar a quantificao dos compostos em anlise, a aquisio de dados foi realizada em modo MRM. Uma vez que se utilizou um padro interno (heptilamina), a proporcionalidade da intensidade do sinal das aminas biognicas em relao a uma determinada concentrao foi dada em termos de reas relativas, que corresponde razo da intensidade do sinal da amina biognica/intensidade do sinal do padro interno (analito/P.I.). A metodologia analtica desenvolvida foi aplicada determinao dos teores de aminas biognicas nas amostras de msculo de tundeos recolhidas, com uma regularidade semanal, em diferentes estabelecimentos comerciais no decorrer da poca intensiva da sua captura (de Abril a Setembro de 2009). Os teores de aminas biognicas encontrados, entre 2,63 mg/kg (triptamina) e 132,78 mg/kg (tiramina), no ultrapassaram os limites impostos pela Comunidade Europeia para os teores de histamina e para os teores de aminas totais; sendo que, em cerca de 87% das 59 amostras analisadas no foram encontrados teores quantificveis para as quatro aminas biognicas.
Resumo:
A vitamina C uma das vitaminas mais importantes para a nutrio humana e destacase pela sua eficiente aco antioxidante e participao em inmeras reaces metablicas como cofactor enzimtico. A vitamina C inclui vrios compostos que tm actividade biolgica semelhante ao cido L-ascrbico (L-AA), incluindo o produto da sua oxidao, cido desidroascrbico (DHAA), e as formas sintticas. Os seres humanos no so capazes de sintetizar a vitamina C, sendo necessrio obter este nutriente atravs da alimentao. As frutas e vegetais so alimentos ricos em vitamina C, ao contrrio das carnes e cereais. Existem diversos mtodos analticos disponveis para quantificao dos teores de vitamina C nos alimentos, sendo os mtodos cromatogrficos os mais utilizados devido sua capacidade de separao e elevada sensibilidade e preciso. Neste trabalho, foi desenvolvido e validado um mtodo de cromatografia líquida de ultra-eficincia (UHPLC) para determinar o contedo de vitamina C total (L-AA + DHAA) em vrias frutas e vegetais com provenincias diferentes. A produo de produtos hortofrutcolas na ilha da Madeira no auto-suficiente, sendo necessrio importar alguns alimentos. Realizou-se um pequeno estudo comparativo do teor total de vitamina C e a sua degradao nos produtos locais e importados. O DHAA foi medido indirectamente atravs da reaco com o redutor DL-1,4-ditiotreitol (DTT), antes da injeco cromatogrfica. Os resultados obtidos foram comparados com a titulao iodomtrica. As amostras foram extradas durante 5 dias consecutivos sendo os extractos resultantes armazenados a -80C imediatamente aps a extraco at ao dia de anlise. A estabilidade do L-AA nos extractos conservados a diferentes temperaturas e os efeitos do cozimento dos alimentos sobre esta molcula foram avaliados. A actividade antioxidante dos produtos hortofrutcolas foi tambm medida pelo mtodo ABTS (2,2-azino-bis(3-etilbenzotiazolina- 6-sulfonato). O estudo da validao do mtodo apresentou resultados bastante satisfatrios, demonstrando uma boa repetibilidade e sensibilidade elevada. Alm disso, o mtodo proposto revelou ser uma abordagem melhorada, simples e rpida para a determinao do contedo de vitamina C total em diversos produtos alimentares.
Resumo:
Com a realizao deste trabalho pretendeu-se estabelecer o perfil urinrio de nveis de biomarcadores do stress oxidativo (5-HMU; UAc; MDA; 8-OHdG) em indivduos saudveis (grupo controlo) comparando com o de doenas cardiovasculares (grupo CVD) de modo a avaliar o seu potencial como possveis biomarcadores da possibilidade de ocorrncia de CVD. A extrao dos compostos alvos foi realizada por recurso a uma nova tcnica extrativa - microextrao com adsorvente empacotado em seringa (MEPS) controlada digitalmente (eVol). A anlise dos biomarcadores foi efetuada por cromatografia líquida de ultra eficincia (UHPLC) utilizando como coluna analtica a HSS T3 (100 mm 2,1 mm, 1,7 m de tamanho da partcula) e com um sistema deteo de fotodiodos (PDA). Otimizaram-se os parmetros experimentais com influncia no processo extrativo, nomeadamente no que se refere ao tipo de adsorvente, influncia do pH, ao volume de amostra, ao nmero de ciclos extrativos, lavagem e ao volume de eluio. Foram ensaiadas diferentes condies experimentais e selecionadas as que corresponderam a uma maior eficincia extrativa, expressa pela rea total relativa dos analitos e reprodutibilidade. Os melhores resultados foram obtidos usando como adsorvente C8, o pH da amostra ajustado a 6, o adsorvente foi carregado com 5x50 L de amostra e a eluio com 1x50 L de 0,01% cido formico e 3x50 L de 20% metanol. Para a separao cromatogrfica dos analitos usou-se uma fase mvel binria (0,01% cido frmico:20% metanol), em modo isocrtico e um fluxo de 250 L min-1. O mtodo analtico foi validado em termos de seletividade, linearidade, limite de deteo (LOD), limite de quantificao (LOQ), efeito matriz, exatido e preciso (intra e interdias) e aplicada a determinao de biomarcadores alvo nos dois grupos estudados, obtiveram-se bons resultados em termos seletividade e linearidade (R2>0,9906), os valores de LOD e LOQ obtidos foram baixos, variando entre 0,00005 - 0,72 g mL-1 e 0,00023 2,31 g mL-1 respetivamente. Os resultados da percentagem de recuperao (91,06 123,02 %), preciso intra-dia (0,95 8,34 %), preciso inter-dia (4,58 -6,33 %) e o efeito de matriz (60,11 110,29 %) deste mtodo foram satisfatrios. A aplicao da metodologia validada aos dois grupos em estudo permitiu concluir que as concentraes de UAc e MDA entre os dois grupos, contrariamente ao 5-HMU e ao 8- OhdG cujas concentraes so estatisticamente diferentes entre o grupo controlam e o grupo CVD.
Resumo:
Nesta dissertao apresento um estudo detalhado de vrios aspectos da interaco entre um plasma de arco de alta presso e ctodos refractrios. Um modelo da camada de plasma junto ao ctodo num plasma sujeito a uma presso da ordem de uma ou vrias atmosferas reconsiderado com base em recentes resultados tericos. A fsica da camada de plasma junto ao ctodo analisada para valores da queda de tenso na camada de plasma junto ao ctodo at 50V, de acordo com recentes resultados experimentais que mostram que a queda de tenso na camada de plasma junto ao ctodo numa descarga de arco de alta presso pode atingir valores to elevados. So identificados os mecanismos que originam a no monotonia da dependncia da densidade de fluxo de energia (proveniente do plasma para a superfcie do ctodo) em relao temperatura da superfcie do ctodo, para um valor fixo da queda de tenso junto ao ctodo. Uma descrio fechada da interaco plasma-ctodo obtida por meio da resolução numrica do problema no linear com condies de fronteira para a distribuio da temperatura no interior do corpo do ctodo. So apresentados resultados da modelao numrica da descarga difusa nas condies de funcionamento de uma lmpada de descarga experimental, sendo bom o acordo entre os resultados numricos e os dados experimentais. Manchas solitrias num ctodo plano infinito e modos difuso e mancha axialmente simtricos em ctodos finitos de descargas de arco de alta presso so estudados num grande intervalo de corrente. So analisados aspectos gerais e apresentados resultados numricos referentes a ctodos de tungstnio planos e de forma cilndrica a operar num plasma de argon presso atmosfrica para correntes de arco at 100 kA. mostrado, em particular, que a temperatura da superfcie do ctodo no interior de uma mancha solitria varia relativamente pouco, podendo ser estimada com uma preciso de cerca de 200 300K sem ser necesrio resolver a equao da conduo trmica no corpo do ctodo. O comportamento assimpttico das solues para um ctodo finito no caso limite de altas correntes encontrado e confirmado pelos resultados numricos. confirmado um padro geral das caractersticas tenso-corrente de vrios modos de transferncia de corrente em ctodos finitos sugerido previamente com base numa anlise de bifurcaes. estudada a transio de modos mancha num ctodo finito no limite de ctodos de grandes dimenses para o modo mancha solitria num ctodo plano infinito. estabelecido que o modo mancha solitria representa uma forma limite do modo mancha de alta tenso num ctodo finito. considerada a questo da distino entre modo difuso e modo mancha num ctodo finito. desenvolvida uma abordagem para o clculo de pontos de bifurcao nos quais solues mancha tridimensionais bifurcam-se a partir de solues que descrevem o modo difuso e modos mancha axialmente simtricos. Em particular, calculado o primeiro ponto de bifurcao posicionado na soluo que descreve o modo difuso e, por conseguinte, o seu limite de estabilidade, isto , a corrente abaixo da qual o modo difuso torna-se instvel. So apresentados os resultados da modelao numrica efectuada para o caso de um ctodo de tungstnio de forma cilndrica a operar num plasma de alta presso. estudado o efeito produzido no limite de estabilidade pelas variaes dos parmetros de controle (dimenses do ctodo, funo de trabalho do material do ctodo, tipo e presso do gs que produz o plasma). Foi encontrado que o comportamento do limite de estabilidade sujeito a estas variaes est em conformidade com as tendncias observadas experimentalmente. Foi encontrado que o limite de estabilidade muito mais sensvel s variaes dos parmetros de controle do que as caractersticas tenso-corrente do modo difuso, sendo o efeito mais forte produzido pelas variaes das dimenses do ctodo e da funo de trabalho do material do ctodo. Este resultado est em conformidade com o facto experimental de que a transio difuso-mancha de difcil reproduo.
