6 resultados para Mycobacterium tuberculosis Teses
em Lume - Repositório Digital da Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Resumo:
Entre as doenas causadas por bactrias do gnero Mycobacterium, a tuberculose por M. tuberculosis a mais conhecida. O diagnstico da doena feito utilizando-se um conjunto de exames que possibilitam a identificao da mesma (WATT, 2000). Contudo, sabe-se que o diagnstico combinado de microscopia direta e com o posterior isolamento em meio de cultivo o padro-ouro. A principal desvantagem desse mtodo que tal bactria possui um crescimento lento (cerca de 8 semanas). Recentemente, a deteco de doenas atravs da tcnica de reao em cadeia da polimerase (PCR) tem proporcionado avanos significativos no diagnstico. O uso da amplificao especfica de genes, para identificar a M. tuberculosis, tais como rDNA 16S, IS6110 ou a regio intergnica senX3-regX3, tem apresentado algumas restries, ao nvel de confiabilidade e sensibilidade, para a aplicao da tcnica de PCR. O presente estudo mostra a construo e a aplicao de um novo alvo para a aplicao da PCR no diagnstico da tuberculose, baseado no ensaio da diferena de organizao gnica do operon plcA, B e C diferenciando a M. tuberculosis das demais micobactrias. Neste trabalho, foram examinadas 273 amostras de pacientes com suspeita de tuberculose, sendo estas submetidas ao estudo comparativo da tcnica de PCR versus cultivo (padro ouro). A PCR amplificou fragmentos de 439pb. Os resultados mostram 93,7% de acurcia para PCR/Cultivo (p<000,1), 93,1% de sensibilidade com intervalo de confiana de 88,7-96,0 e especificidade de 96,4% com intervalo de confiana de 96,4-99,4. O valor da estatstica Kappa (k) foi de 0,82 com erro padro de 0,041, demonstrando um alinhamento quase perfeito para a verificao do grau de concordncia entre os testes. Desta forma, o uso desta nova regio para a amplificao da PCR se mostra uma importante e confivel ferramenta no diagnstico especfico da tuberculose. Outra regio que compreende parte dos genes mbaA e inhA foi utilizada para diferenciar o Complexo tuberculosis do Complexo avium. Porm, novos experimentos sero necessrios para o emprego desta regio como uma ferramenta de diagnstico.
Resumo:
Resumo no disponvel.
Resumo:
A Tuberculose (TB) a principal causa de bitos entre as doenas infecciosas causadas por um nico agente. De acordo com a Organizao Mundial da Sade (OMS) o agente etiolgico da TB no homem, o complexo Mycobacterium (M. tuberculosis, M. africanum, M. bovis) responsvel por cerca de 8 milhes de novas infeces e 3 milhes de mortes a cada ano no mundo. No comeo da dcada de 80, a reemergncia da TB em pases em desenvolvimento deve-se crescente incidncia do Vrus da Imunodeficincia Humana (HIV), falta de recursos para o tratamento desta doena e proliferao de cepas resistentes a mltiplas drogas (MDR-TB). Esta situao criou a necessidade da busca por novos agentes antimicobacterianos capazes de reduzir o tempo de tratamento, melhorar a adeso dos pacientes ao mesmo e ser efetiva contra cepas MDR-TB. A via do chiquimato leva biossntese do corismato, o precursor de aminocidos aromticos, tirosina, triptofano e fenilalanina. A primeira reao na biossntese de fenilalanina envolve a converso de corismato a prefenato, catalisada pela corismato mutase. A segunda reao na biossntese de fenilalanina a descarboxilao e desidratao de prefenato a fenilpiruvato, catalisada pela prefenato desidratase. Embora ausente em mamferos, esta via est presente em bactrias, algas, fungos, plantas e parasitos do Phyllum Apicomplexa. Esta rota essencial em M. tuberculosis e, portanto, suas enzimas representam alvos potenciais para o desenvolvimento de novas drogas antimicobacterianas. O objetivo deste trabalho foi estudar o gene pheA da linhagem de M. tuberculosis H37Rv e seu produto, a enzima prefenato desidratase Para isso, DNA genmico de M. tuberculosis H37RV foi extrado e o gene pheA foi amplificado pela tcnica de PCR, clonado no vetor de expresso pET-23a(+), seqenciado e superexpresso em clulas de Escherichia coli BL21(DE3). Os resultados obtidos confirmaram a regio predita para o gene pheA, que foi amplificado com sucesso, mostrando 963 pb, sendo que a presena de 10% dimetil sulfoxido (DMSO) mostrou ser essencial para permitir a desnaturao do DNA rico em bases G-C. Anlise da seqncia nucleotdica pelo mtodo de Sanger confirmou a identidade do gene clonado e demonstrou que nenhuma mutao foi introduzida pelos passos de PCR e clonagem. A enzima prefenato desidratase foi superexpressa em clulas de E. coli BL21(DE3) eletroporadas com pET-23a(+)::pheA. Anlise por SDS-PAGE mostrou expresso significativa de uma protena com aproximadamente 33kDa, estando de acordo com a massa molecular esperada para a prefenato desidratase. A protena recombinante foi superexpressa sem a adio de IPTG, e a presena da protena pde ser detectada em todos os intervalos de tempo testados (6, 9 e 24 horas depois da OD600nm alcanar o valor de 0,5). Foi realizado ensaio enzimtico com a prefenato desidratase de acordo com Gething et al. (1976) utilizando prefenato de brio como substrato e coeficiente de extino molar de 17.500 a 320 nm para calcular a concentrao de fenilpiruvato. Houve um aumento de 1766 vezes na atividade especfica da prefenato desidratase no extrato bruto da protena recombinante em relao ao controle, no qual o vetor pET23a(+) sem o gene pheA foi introduzido em clulas de E. coli BL21(DE3).
Resumo:
O estudo pretendeu abordar a imunidade humoral na Tuberculose. Foi um estudo de teste diagnstico que avaliou um antgeno especfico, constituinte da parede celular da micobactria, denominado LIPOARABINOMANNAN (LAM), proveniente de Cambridge, MA, USA da Companhia Dyna-Gen. O objetivo principal do estudo foi a deteco de anticorpos IgG anti-LAM em casos de tuberculose pulmonar, extrapulmonar e formas combinadas da doena. A casustica total compreendeu 173 pacientes portadores de tuberculose, sendo a mesma confirmada por mtodos bacteriolgicos e/ou anatomopatolgicos de bipsias de diversos rgos em 114 casos (65,8%). Em 46 casos (26,5%) a doena se confirmou por rigorosos critrios clnicos, radiolgicos e de seguimento aps tratamento adequado. Cento e quinze pacientes eram do sexo masculino (66,5%) e 58 do sexo feminino (33,5%). Cento e trinta e um eram brancos (75,7%), 24 negros (13,9%) e 18 mistos (10,4%). O total de formas pulmonares foi de 88 casos (51%), sendo 81 (46,8%) formas bacilferas e 7 casos (4,0%) no-bacilferas. Dos casos com baciloscopia direta negativa, 3 apresentaram culturas positivas, 2 culturas negativas e em 2 casos a mesma no foi realizada. Formas extrapulmonares compreenderam 71 casos (41%) com predomnio de forma miliar, ganglionar, pleural e do SNC. A combinao de ambas as formas ocorreu em 14 casos (8,1%). Radiologicamente, houve predomnio de leses escavadas (30,1%), consolidao (13,9%), padro miliar (11%) e exame radiolgico normal (11%), alm de outros achados. Da srie, 118 pacientes eram HIV negativos (68,2%) e 55 eram HIV positivos (31,8%). As principais comorbidades associadas foram Diabetes Melittus (DM), Alcoolismo, Cardiopatia e Neoplasia, entre outras. Exames culturais foram realizados em 145 pacientes, sendo que em 72 casos a cultura foi positiva (41,6%) e foi negativa em 10 casos (5,8%). Dos 72 exames culturais positivos, o teste do MycoDot foi positivo em 47 casos (65,2%) e negativo em 25 (34,7%). Em 10 exames culturais negativos, o mesmo foi positivo em 6 casos (60%) e negativo em 4 casos (40%). Em 63 exames culturais no realizados, o teste do MycoDot foi positivo em 46 casos e negativos em 17. Os resultados do teste MycoDot na srie total foram: positivos em 120 pacientes (69,4%) e negativos em 53 pacientes (30,6%). As formas pulmonares bacilferas, no bacilferas, extrapulmonares e combinadas apresentaram sensibilidade de 74,1%, 85,7%, 63,4% e 64,3% respectivamente. O grupo controle foi de 77 indivduos assim distribudos: 41 sadios, 16 portadores de leses residuais de tuberculose, 6 sadios com BCG prvia, 6 sadios sem BCG prvia e 8 com outras comorbidades. O resultado do teste MycoDot foi negativo em 73 casos (94,8%) e positivo em 4 casos (5,2%). A sensibilidade da casustica total foi de 69,4%, a especificidade foi de 94,8%, o valor preditivo positivo (VPP) foi de 96,8% e o valor preditivo negativo (VPN) foi de 57,9%. Dos pacientes HIV positivos a sensibilidade foi de 61,8% e a especificidade foi de 100%. Nos pacientes HIV negativos a sensibilidade foi de 72,9% e a especificidade foi de 94,7%. Concluiu-se que o Teste MycoDot de fcil realizao, baixo custo, podendo ser til como uma ferramenta adicional para o diagnstico da tuberculose.
Resumo:
A tuberculose resistente a mltiplos frmacos (TB MDR) definida como uma forma de tuberculose (TB) causada por Mycobacterium tuberculosis resistente a pelo menos isoniazida e rifampicina. A TB MDR um problema mundial crescente resultante da no adeso dos pacientes ao tratamento e pelo gerenciamento ineficaz da doena pelos sistemas de sade. Este estudo foi realizado com o objetivo de identificar os fatores de risco e os padres de transmisso da TB MDR no Estado do Rio Grande do Sul, comparando os resultados obtidos com aqueles casos de TB suscetveis aos frmacos. Durante os anos de 1999 e 2000 foram identificados 60 isolados MDR no Laboratrio Central do RS (LACEN) e 202 isolados suscetveis aos frmacos anti-TB. Estes isolados foram analisados utilizando a tcnica de Polimorfismo do Tamanho dos Fragmentos de Restrio (RFLP) baseado no IS6110. Os dados clnicos e demogrficos dos pacientes portadores destas linhagens tambm foram analisados. Nos isolados que apresentaram seis ou menos cpias de IS6110 foi realizada uma segunda tcnica de genotipagem, o Spoligotyping. Os pacientes portadores de linhagens de M. tuberculosis com padres idnticos foram considerados clusters. Foi observado que entre os 262 isolados, 94 (36%) pertenciam a 20 distintos clusters, e aps a anlise por Spoligotyping, 89 destes isolados (34%) permaneceram em cluster. Os isolados MDR no diferiram estatisticamente dos isolados suscetveis na proporo de formao de cluster. Foi observada associao significante entre a ocorrncia de TB MDR e tratamento prvio (p < 0,001) e falncia no tratamento (p < 0,001). No entanto, os pacientes HIV positivos foram associados com TB suscetvel (p = 0,024). Tambm foi identificado que pacientes no casados desenvolveram mais TB devida transmisso recente (p < 0,005). A introduo da terapia supervisionada de curta durao (DOTS) no RS ser importante, pois auxiliar na diminuio das taxas de falncia e abandono de tratamento, evitando o desenvolvimento de novas linhagens MDR.
