19 resultados para Hypertrophic cardiomyopathy
em Université de Montréal, Canada
Resumo:
Les cardiomyopathies sont une atteinte du myocarde qui se prsente sous diffrentes formes telles que lhypertrophie ou la dilatation des chambres cardiaques. Ces maladies du muscle cardiaque peuvent affecter la contraction cardiaque et dgnrer en insuffisance cardiaque. Aussi, lhypertrophie et linsuffisance cardiaques sont associes une augmentation de la morbidit et de la mortalit cardiovasculaires principalement due au remodelage lectrique et la survenue darythmies. De plus, le retard de repolarisation, associ une diminution des courants K+, est un des troubles cardiaques les plus couramment observs lors de ces pathologies cardiaques. Langiotensine II (Ang II) et la norpinphrine, principaux effecteurs du systme rnine-angiotensine et du systme nerveux sympathique, peuvent tous deux agir directement sur le cur en liant les rcepteurs de type 1 de lAng II (AT1) et les rcepteurs adrnergiques. LAng II et la norpinphrine sont associes au dveloppement des cardiomyopathies, au remodelage cardiaque et une prolongation de la dure du potentiel d'action cardiaque. Deux modles de souris trangniques surexprimant spcifiquement au niveau cardiaque les rcepteurs AT1 (la souris AT1R) ou les rcepteurs 1B-adrnergiques (la souris 1B-AR) ont t crs afin dtudier les effets de ces stimuli sur le cur. Ces deux modles de souris dveloppent du remodelage cardiaque, soit de lhypertrophie chez les souris AT1R (cardiomyopathie hypertrophique) ou une dilatation des chambres cardiaques chez les souris 1B-AR (cardiomyopathie dilate). Au stade avanc de la maladie, les deux modles de souris transgniques sont insuffisants cardiaques. Des donnes prliminaires ont aussi montr que les souris AT1R et les souris 1B-AR ont une incidence accrue darythmies ainsi quune prolongation de la dure du potentiel daction. De plus, ces deux modles de souris meurent subitement et prmaturment, ce qui laissait croire quen conditions pathologiques, lactivation des rcepteurs AT1 ou des rcepteurs 1B-adrnergiques pouvait affecter la repolarisation et causer lapparition darythmies graves. Ainsi, lobjectif de ce projet tait de caractriser la repolarisation ventriculaire des souris AT1R et 1B-AR afin de dterminer si la suractivation chronique des rcepteurs de lAng II ou des rcepteurs 1B-adrnergiques pouvait affecter directement les paramtres lectrophysiologiques et induire des arythmies. Les rsultats obtenus ont rvl que les souris AT1R et les souris 1B-AR prsentent un retard de repolarisation (prolongation de lintervalle QTc (dans llectrocardiogramme) et de la dure du potentiel daction) caus par une diminution des courants K+ (responsables de la repolarisation). Aussi, lincidence darythmies est plus importante dans les deux groupes de souris transgniques comparativement leur contrle respectif. Finalement, nous avons vu que les troubles de repolarisation se produisent galement dans les groupes de souris transgniques plus jeunes, avant lapparition de lhypertrophie ou du remodelage cardiaque. Ces rsultats suggrent quen conditions pathologiques, lactivation chronique des rcepteurs de lAng II ou des rcepteurs 1B-adrnergiques peut favoriser le dveloppement darythmies en retardant la repolarisation et cela, indpendamment de changements hmodynamiques ou du remodelage cardiaque. Les rsultats de ces tudes pourront servir comprendre les mcanismes responsables du dveloppement darythmies cardiaques lors du remodelage et de linsuffisance cardiaques et pourraient aider optimiser le choix des traitements chez ces patients atteints ou risque de dvelopper de lhypertrophie ou du remodelage cardiaque.
Resumo:
Affiliation: Unit de recherche en Arthrose, Centre de recherche du Centre Hospitalier de l'Universit de Montral, Hpital Notre-Dame
Resumo:
La cardiomyopathie/dysplasie arythmogne du ventricule droit (ARVC/D) est un dsordre dorigine gntique caractris par le remplacement du myocarde par du tissus fibro-adipeux dans le ventricule droit. Ce dsordre est responsable dun grand pourcentage de mort subite, spcialement chez les plus jeunes. ARVC/D est difficile diagnostiquer avec les outils cliniques actuels. Elle est cause en grande majorit par des mutations dans les protines desmosomales. ARVC/D a donc des implications dune grande importance chez les membres de la famille, qui peuvent sans le savoir, tre aussi risque de mort subite. Dans le but damliorer le diagnostique, un nouvel outil, le test gntique, est de plus en plus utilis. Hypothses: Dans le but dvaluer la valeur du test gntique en complment du test clinique classique chez ARVC/D nous avons effectu une investigation clinique et gntique chez 23 cas-index atteints. Mthodes: Les cas-index sont diagnostiqu aprs une mort subite dans la famille ou aprs un examen clinique pouss pour arythmies. Le diagnostique dARVC/D a t fait avec les outils cliniques selon les critres. Lanalyse gntique des protines desmosomales associes la maladie a t effectue en squenant leurs exons ainsi que les rgions introniques ncessaires lpissage alternatif. Rsultats: Le diagnostique clinique tait clair dans 18/23 et incertain dans 5/23 des individus. Nous avons identifi 15 diffrentes mutations chez 10 cas-index. 64% des mutations navaient jamais t dcrites. De plus, nous avons observ la prsence de double ou triple mutant dans 40% des cas-index positifs. Les individus avec mutations sont plus jeunes et ont plus de symptmes que les individus sans mutation. Conclusion: Les tests gntiques sont positifs dans 43% des patients avec ARVC/D. Lutilisation de la technologie gntique base sur lidentification de mutations connues a une valeur limite vu le haut pourcentage des mutations nouvelles dans la maladie. La prsence de double, mme de triple mutant nest pas associ avec un phnotype plus svre, mais renforce lide de la ncessit dun test gntique pour tous les gnes. Le test gntique est un outil fort utile ajouter aux tests cliniques pour le diagnostique des patients qui ne remplissent pas tous les critres cliniques de la maladie. Mots cls: gntique, ARVC/D, mort subite, desmosome
Resumo:
En fvrier, 2009 un rapport de PHRMA (Pharmaceutical Research and Manufacturers of America) confirmait que plus de 300 mdicaments pour le traitement des maladies cardiaques taient en phase dessais cliniques ou en rvision par les agences rglementaires. Malgr cette abondance de nouvelles thrapies cardiovasculaires, le nombre de nouveaux mdicaments approuvs chaque anne (toutes indications confondues) est en dclin avec seulement 17 et 24 nouveaux mdicaments approuvs en 2007 et 2008, respectivement. Seulement 1 mdicament sur 5000 sera approuv aprs 10 15 ans de dveloppement au cot moyen de 800 millions $. De nombreuses initiatives ont t lances par les agences rglementaires afin daugmenter le taux de succs lors du dveloppement des nouveaux mdicaments mais les rsultats tardent. Cette stagnation est attribue au manque defficacit du nouveau mdicament dans bien des cas mais les valuations dinnocuit remportent la palme des causes darrt de dveloppement. Primum non nocere, la maxime dHippocrate, pre de la mdecine, demeure dactualit en dveloppement prclinique et clinique des mdicaments. Environ 3% des mdicaments approuvs au cours des 20 dernires annes ont, par la suite, t retirs du march suite lidentification deffets adverses. Les effets adverses cardiovasculaires reprsentent la plus frquente cause darrt de dveloppement ou de retrait de mdicament (27%) suivi par les effets sur le systme nerveux. Aprs avoir dfini le contexte des valuations de pharmacologie de scurit et lutilisation des bio-marqueurs, nous avons valid des modles dvaluation de linnocuit des nouveaux mdicaments sur les systmes cardiovasculaires, respiratoires et nerveux. voluant parmi les contraintes et les dfis des programmes de dveloppements des mdicaments, nous avons valu lefficacit et linnocuit de loxytocine (OT), un peptide endogne des fins thrapeutiques. LOT, une hormone historiquement associe la reproduction, a dmontr la capacit dinduire la diffrentiation in vitro de lignes cellulaires (P19) mais aussi de cellules souches embryonnaires en cardiomyocytes battants. Ces observations nous ont amen considrer lutilisation de lOT dans le traitement de linfarctus du myocarde. Afin darriver cet objectif ultime, nous avons dabord valu la pharmacocintique de lOT dans un modle de rat anesthsi. Ces tudes ont mis en vidence des caractristiques uniques de lOT dont une courte demi-vie et un profil pharmacocintique non-linaire en relation avec la dose administre. Ensuite, nous avons valu les effets cardiovasculaires de lOT sur des animaux sains de diffrentes espces. En recherche prclinique, lutilisation de plusieurs espces ainsi que de diffrents tats (conscients et anesthsis) est reconnue comme tant une des meilleures approches afin daccrotre la valeur prdictive des rsultats obtenus chez les animaux la rponse chez lhumain. Des modles de rats anesthsis et veills, de chiens anesthsis et veills et de singes veills avec suivi cardiovasculaire par tlmtrie ont t utiliss. LOT sest avr tre un agent ayant dimportants effets hmodynamiques prsentant une rponse variable selon ltat (anesthsi ou veill), la dose, le mode dadministration (bolus ou infusion) et lespce utilise. Ces tudes nous ont permis dtablir les doses et rgimes de traitement nayant pas deffets cardiovasculaires adverses et pouvant tre utilises dans le cadre des tudes defficacit subsquentes. Un modle porcin dinfarctus du myocarde avec reperfusion a t utilis afin dvaluer les effets de lOT dans le traitement de linfarctus du myocarde. Dans le cadre dun projet pilote, linfusion continue dOT initie immdiatement au moment de la reperfusion coronarienne a induit des effets cardiovasculaires adverses chez tous les animaux traits incluant une rduction de la fraction de raccourcissement ventriculaire gauche et une aggravation de la cardiomyopathie dilate suite linfarctus. Considrant ces observations, lapproche thrapeutique ft rvise afin dviter le traitement pendant la priode dinflammation aige considre maximale autour du 3ime jour suite lischmie. Lorsquiniti 8 jours aprs lischmie myocardique, linfusion dOT a engendr des effets adverses chez les animaux ayant des niveaux endognes dOT levs. Par ailleurs, aucun effet adverse (amlioration non-significative) ne ft observ chez les animaux ayant un faible niveau endogne dOT. Chez les animaux du groupe placebo, une tendance observer une meilleure rcupration chez ceux ayant des niveaux endognes initiaux levs ft note. Bien que la taille de la zone ischmique risque soit comparable celle rencontre chez les patients atteints dinfarctus, lutilisation danimaux juvniles et labsence de maladies coronariennes sont des limitations importantes du modle porcin utilis. Le potentiel de lOT pour le traitement de linfarctus du myocarde demeure mais nos rsultats suggrent quune administration systmique titre de thrapie de remplacement de lOT devrait tre considre en fonction du niveau endogne. De plus amples valuations de la scurit du traitement avec lOT dans des modles animaux dinfarctus du myocarde seront ncessaires avant de considrer lutilisation dOT dans une population de patients atteint dun infarctus du myocarde. En contre partie, les niveaux endognes dOT pourraient possder une valeur pronostique et des tudes cliniques cet gard pourraient tre dintrt.
Resumo:
La barrire hmato-encphalique (BHE) protge le systme nerveux central (SNC) en contrlant le passage des substances sanguines et des cellules immunitaires. La BHE est forme de cellules endothliales lies ensemble par des jonctions serres et ses fonctions sont maintenues par des astrocytes, celles ci scrtant un nombre de facteurs essentiels. Une analyse protomique de radeaux lipidiques de cellules endothliales de la BHE humaine a identifi la prsence de la voie de signalisation Hedgehog (Hh), une voie souvent lies des processus de dveloppement embryologique ainsi quau niveau des tissus adultes. Suite nos expriences, jai dtermin que les astrocytes produisent et secrtent le ligand Sonic Hh (Shh) et que les cellules endothliales humaines en cultures primaires expriment le rcepteur Patched (Ptch)-1, le co-rcepteur Smoothened (Smo) et le facteur de transcription Gli-1. De plus, lactivation de la voie Hh augmente ltanchit des cellules endothliales de la BHE in vitro. Le blocage de lactivation de la voie Hh en utilisant lantagoniste cyclopamine ainsi quen utilisant des souris Shh dficientes (-/-) diminue lexpression des protines de jonctions serres, claudin-5, occcludin, et ZO-1. La voie de signalisation sest aussi montre comme tant immunomodulatoire, puisque lactivation de la voie dans les cellules endothliales de la BHE diminue lexpression de surface des molcules dadhsion ICAM-1 et VCAM-1, ainsi que la scrtion des chimiokines pro-inflammatoires IL-8/CXCL8 et MCP-1/CCL2, crant une diminution de la migration des lymphocytes CD4+ travers une monocouche de cellules endothliales de la BHE. Des traitements avec des cytokines pro-inflammatoires TNF- and IFN- in vitro, augmente la production de Shh par les astrocytes ainsi que lexpression de surface de Ptch-1 et de Smo. Dans des lsions actives de la sclrose en plaques (SEP), o la BHE est plus permable, les astrocytes hypertrophiques augmentent leur expression de Shh. Par contre, les cellules endothliales de la BHE naugmentent pas leur expression de Ptch-1 ou Smo, suggrant une dysfonction dans la voie de signalisation Hh. Ces rsultats montrent que la voie de signalisation Hh promeut les proprits de la BHE, et quun environnement dinflammation pourrait potentiellement drgler la BHE en affectant la voie de signalisation Hh des cellules endothliales.
Resumo:
Lendothline-1 (ET-1) est un peptide vasoactif extrmement puissant qui possde une forte activit mitognique dans les cellules du muscle lisse vasculaire (VSMCs). Il a t dmontr que lET-1 est implique dans plusieurs maladies cardio-vasculaires, comme lathrosclrose, l'hypertension, la restnose aprs l'angioplastie, linsuffisance cardiaque et l'arythmie. LET-1 exerce ses effets via plusieurs voies de signalisation qui incluent le Ca2+, les protines kinases actives par les mitognes (MAPKs) y compris les kinases rgules par les signaux extracellulaires (ERK1/2) et la voie de la phosphatidylinositol 3-kinase (PI-3K)/protein kinase B (PKB). Plusieurs tudes ont dmontr que les drivs ractifs de l'oxygne (ROS) peuvent jouer un rle important dans la signalisation dERK1/2 et de PKB induite par plusieurs facteurs de croissance et hormones. Nous avons prcdemment montr que l'ET-1 produit des ROS qui agissent comme mdiateur de la signalisation cellulaire induite par lET-1. Le peroxyde dhydrogne (H2O2), une molcule qui appartient la famille des ROS, peut activer les voies de la MAPK et de la PKB dans les VSMCs. Par ailleurs, nos rsultats suggrent galement que le Ca2+ et la calmoduline (CaM) sont essentiels pour la phosphorylation dERK1/2, de p38 et de PKB induite par le H2O2 dans les VSMCs. La Ca2+/CaM-dependent protein kinases II (CaMKII) est une srine/thronine protine kinase multifonctionnelle active par le Ca2+/CaM. Il a t montr que la CaMKII est implique dans les voies de signalisation induite par le H2O2 dans les cellules endothliales. Cependant, le rle de la CaMKII dans la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de la proline-rich tyrosine kinase 2 (Pyk2) induite par lET-1 et le H2O2, de mme que son rle dans leffet hypertrophique et prolifratif de lET-1 dans les VSMCs demeure inexplor. Le monoxyde dazote (NO) est une molcule vasoactive implique dans la rgulation de plusieurs rponses hormonales. Le NO peut moduler la signalisation contrlant la croissance cellulaire induite par plusieurs agonistes do son rle protecteur dans le systme vasculaire. Des tudes ont montr que le NO peut inhiber la voie de Ras/Raf/ERK1/2 et la voie de PKB induite par le facteur de croissance endothlial (EGF) et langiotensine II (Ang II). Beaucoup dautres travaux ont mis en vidence un cross-talk entre les voies de signalisation actives par lET-1 et le NO. La capacit du NO inhiber la signalisation intracellulaire induite par lET-1 dans les VSMCs demeure inconnue. Le travail prsent dans cette thse vise dterminer le rle du systme Ca2+-CaM-CaMKII dans la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 induite par lET-1 et le H2O2 ainsi que son rle dans la croissance et la prolifration cellulaire induites par lET-1 dans les VSMCs. Nous avons galement test le rle du NO dans la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 ainsi que la synthse protique induite par lET-1. Dans la premire partie de notre tude, nous avons examin le rle de la CaMKII dans la phosphorylation dERK1/2 et de PKB induite par lET-1 dans les VSMCs en utilisant trois approches diffrentes i.e. l'usage d'inhibiteurs pharmacologiques, un peptide auto-inhibiteur de la CaMKII (CaMKII AIP) et la technique de siRNA. Nous avons dmontr que la CaMKII est implique dans la phosphorylation dERK1/2 et de PKB induite par lET-1 dans les VSMCs. Des tudes prcdentes ont montr laide dinhibiteurs pharmacologiques comme le KN-93 que l'Ang II et les agents induisant une augmentation de la concentration en Ca2+ intracellulaire comme lionomycine, provoquent la phosphorylation dERK1/2 via la CaM dans les VSMCs. Cependant, en utilisant diffrentes approches, nos tudes ont montr pour la premire fois une implication de la CaMKII dans la phosphorylation dERK1/2 et de PKB induite par lET-1 dans les VSMCs. Nous avons galement rapport pour la premire fois, un rle crucial de la CaMKII dans la pathophysiologie vasculaire associe lET-1 puisque lactivation de la CaMKII joue un rle important dans lhypertrophie et la croissance cellulaire. Dans la deuxime partie, la lumire des tudes prcdentes qui montraient que les ROS agissent comme mdiateurs de la signalisation induite par lET-1 dans les VSMCs, nous avons examin si la CaMKII est galement implique dans lactivation des voies dERK1/2 et de PKB induite par le H2O2. En utilisant des approches pharmacologiques et molculaires, nous avons montr, comme pour lET-1, que la CaMKII joue un rle critique en amont de la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 induite par le H2O2. Nous avons prcdemment montr que la transactivation du rcepteur de type I de linsulin-like growth factor (IGF-1R) est ncessaire lactivation de PKB induite par le H2O2. Pour cette raison, nous avons examin l'effet de l'inhibition de la CaMKII par linhibiteur pharmacologique ou par le knock-down de la CaMKII sur la phosphorylation dIGF-1R induite par le H2O2. Les rsultats dmontrent que la CaMKII joue un rle critique en amont de la phosphorylation dERK1/2, de PKB et dIGF-1R induite par le H2O2. Dans la troisime partie de notre tude, nous avons galement examin le mcanisme molculaire par lequel le NO exerce ses effets anti-mitogniques et anti-hypertrophiques dans la signalisation induite par lET-1. En testant l'effet de deux diffrents donneurs de NO (S-nitroso-N-acetylpenicillamine (SNAP), sodium nitroprusside (SNP)) et un inhibiteur de NO synthase, le N (G)-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) dans la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 induite par lET-1, nous avons observ que le NO a un effet inhibiteur sur la signalisation induite par lET-1 dans les VSMCs. Par ailleurs, le 8-Br-GMPc, un analogue du GMPc, a un effet similaire celui des deux donneurs du NO, tandis que loxadiazole quinoxaline (ODQ), un inhibiteur de la guanylate cyclase soluble, inverse l'effet inhibiteur du NO. Nous concluons que le NO diminue la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 induite par lET-1 dune manire dpendante du GMPc. Le NO inhibe aussi les effets hypertrophiques de lET-1 puisque le traitement avec le SNAP diminue la synthse des protines induite par lET-1. En rsum, les tudes prsentes dans cette thse dmontrent que lET-1 et le H2O2 sont des activateurs de la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 dans les VSMCs et que la CaMKII savre ncessaire pour ce processus, en agissant en amont de lactivation de IGF-1R induite par le H2O2 dans les VSMCs. Elles montrent galement que le NO inhibe la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 induite par lET-1. Enfin, nos travaux suggrent aussi que lactivation de la CaMKII stimule la synthse des protines et de lADN induites par lET-1 alors que le NO inhibe la synthse des protines induite par ET-1. Mots cls: Endothline ; Peroxyde d'hydrogne ; CaMKII ; Monoxyde dazote ; Systme vasculaire ; PKB; ERK1/2; IGF-1R; Hypertrophie.
Resumo:
La grossesse induit de profonds changements hmodynamiques et mtaboliques de lorganisme maternel qui ont des consquences sur le cur. Ladaptation du cur cette condition physiologique ncessite un remodelage de sa structure et par consquent des ajustements de sa fonction. Les mcanismes responsables de ces adaptations sont en grande partie inconnus. Cependant, ces connaissances sont essentielles pour la comprhension des complications cardiovasculaires, telle que lhypertension gestationnelle (HG), qui constituent un risque pour la sant de la mre et du ftus. Afin de caractriser les adaptations du cur lors de la grossesse, loriginalit de notre approche exprimentale consistait tudier le remodelage lchelle des cardiomyocytes du ventricule gauche. Ainsi, notre premier objectif tait de dterminer les modifications structurales et fonctionnelles des cardiomyocytes chez la rate en vue didentifier les altrations lors de lHG. Chez les rates gestantes, le remodelage structural des cardiomyocytes se caractrise par une hypertrophie cellulaire avec une augmentation proportionnelle des dimensions. LHG a t induite par un supplment sodique (0.9% NaCl) dans la dite. Linadaptation structurale lors de lHG se traduit par une diminution du volume cellulaire. Ltude des modifications fonctionnelles a rvl que lors de la gestation le fonctionnement contractile des cellules est dpendant de ladaptation du mtabolisme maternel. En effet, les substrats nergtiques, lactate et pyruvate, induisent une augmentation de la contractilit des cardiomyocytes. Cet effet est plus faible dans les cellules des rates hypertendues, ce qui suggre des anomalies du couplage excitation-contraction, dans lequel les courants calciques de type L (ICa-L) jouent un rle important. Paradoxalement, le lactate et le pyruvate ont induit une augmentation de la densit des courants ICa-L seulement chez les rates hypertendues. Le rcepteur aux minralocorticodes (RM) est connu pour son implication dans le remodelage structuro-fonctionnel du cur dans les conditions pathologiques mais pas dans celui induit par la grossesse. Notre deuxime objectif tait donc de dterminer le rle du RM dans ladaptation de la morphologie et de la contractilit des cardiomyocytes. Des rates gestantes ont t traites avec le canrnoate de potassium (20 mg/kg/jr), un antagoniste des RM. Linhibition des RM pendant la gestation empche lhypertrophie cellulaire. De plus, linhibition des RM bloque leffet du lactate et du pyruvate sur la contractilit. Chez la femme, la grossesse est associe des changements des proprits lectriques du cur. Sur llectrocardiogramme, lintervalle QTc est plus long, tmoignant de la prolongation de la repolarisation. Les mcanismes rgulant cette adaptation restent encore inconnus. Ainsi, notre troisime objectif tait de dterminer le rle du RM dans ladaptation de la repolarisation. Chez la rate gestante, lintervalle QTc est prolong ce qui est corrobor par la diminution des courants potassiques Ito et IK1. Linhibition des RM pendant la gestation empche la prolongation de lintervalle QTc et la diminution des courants Ito. Les travaux exposs dans cette thse apportent une vision plus prcise du remodelage cardiaque induit par la grossesse, qui est permise par ltude lchelle cellulaire. Nos rsultats montrent que lors de la gestation et de lHG les cardiomyocytes subissent des remodelages morphologiques contrasts. Notre tude a aussi rvl que lors de la gestation, la fonction contractile est tributaire des adaptations mtaboliques et que cette relation est altre lors de lHG. Nos travaux montrent que la rgulation de ces adaptations gestationnelles fait intervenir le RM au niveau de la morphologie, de la relation mtabolisme/fonctionnement contractile et de la repolarisation. En faisant avancer les connaissances sur lhypertrophie de la grossesse, ces travaux vont permettre damliorer la comprhension des complications cardiovasculaires gestationnelles.
Resumo:
Le rcepteur nuclaire Nr5a2 est exprim dans lovaire, plus spcifiquement dans les cellules de granulosa et lutales. Une dpltion conditionnelle de Nr5a2 dans les cellules de granulosa au stade de follicule primaire par croisement de souris Nr5a2-flox et Amhr2-Cre (Nr5a2f/fAmhr2Cre/+) gnre des problmes au niveau de lexpansion du cumulus, de lovulation et de la lutinisation. Ainsi, nous estimons que Nr5a2 rgule les connexions intercellulaires dans le follicule ovarien via la connexine 43 (Cx43), une protine de jonction implique dans lexpansion du cumulus. Le premier objectif de ltude tait de dterminer si labsence dexpansion du cumulus chez les souris Amhr2Cre-cKO est lie labsence de communication intercellulaire adquate entre les cellules de granulosa et de cumulus dans les follicules provulatoires. cette fin, des ovaires de souris immatures Amhr2Cre-cKO et non transgniques ont t prlevs (n=3) aprs un traitement de superstimulation utilisant les gonadotropines eCG suivie de hCG afin dinduire lovulation. Nous avons ainsi dmontr, par RT-PCR, une sous-expression de Cx43 avant et au moment du stimulus ovulatoire (0 h et 2 h) chez le groupe Amhr2Cre-cKO (P<0.01), ce qui pourrait mener un problme dans lacquisition de la comptence dveloppementale de loocyte. Dun autre ct, au moment de lovulation (12 h), lARNm de Cx43 est surexprim dans le groupe Amhr2Cre-cKO, ce qui pourrait prvenir les cellules du cumulus de se dtacher lune de lautre. Nous avons ainsi conclu que Cx43 est un gne sous le contrle de Nr5a2 et quune rgulation errone de ce gne est une cause possible du problme dexpansion du cumulus chez les souris Amhr2Cre-cKO. Afin dexaminer le rle de Nr5a2 dans lovulation et la lutinisation diffrents stades de la maturation folliculaire, nous suggrons que Nr5a2 module la squence temporelle des vnements menant lovulation. En croisant des souris Nr5a2-flox et Cyp19-Cre (Nr5a2f/fCyp19Cre/+), lexpression de Nr5a2 a t interrompue dans les cellules de granulosa des follicules antraux et provulatoires. Aucune porte na t obtenue de ces souris (n=4) durant un essai daccouplement de 6 mois. Chez les souris Cyp19Cre-cKO on remarque la prsence de structures sapparentant des cellules de type lutales et les femelles ges dun an prsentent des kystes folliculaires hmorragiques et une hypertrophie de lpithlium en surface de lovaire. Les deux modles transgniques dmontrent donc une absence de lexpansion du cumulus et de lovulation. En conclusion, Nr5a2 semble rguler diffremment la folliculogense et lovulation dans les cellules de granulosa des follicules primaires et antraux.
Resumo:
Lhypertrophie du ventricule gauche (HVG) est un processus adaptif et compensatoire qui se dveloppe consquemment lhypertension artrielle pour sopposer llvation chronique de la pression artrielle. LHVG est caractrise par une hypertrophie des cardiomyocytes suite laugmentation de la synthse dADN, une prolifration des fibroblastes, une augmentation du dpt de collagne et une altration de la matrice extracellulaire (MEC). Ces changements gnrent des troubles de relaxation et mnent au dysfonctionnement diastolique, ce qui diminue la performance cardiaque. La suractivit du systme nerveux sympathique (SNS) joue un rle essentiel dans le dveloppement de lhypertension artrielle et de lHVG cause de la libration excessive des catcholamines et de leurs effets sur la scrtion des cytokines pro-inflammatoires et sur les diffrentes voies de signalisation hypertrophiques et prolifratives. Le traitement antihypertenseur avec de la moxonidine, un compos sympatholytique daction centrale, permet une rgression de lHVG suite une rduction soutenue de la synthse d'ADN et dune stimulation transitoire de la fragmentation de l'ADN qui se produit au dbut du traitement. En raison de linteraction entre lHVG, les cytokines inflammatoires, le SNS et leurs effets sur les protines de signalisation hypertrophiques, lobjectif de cette tude est de dtecter dans un modle animal dhypertension artrielle et dHVG, les diffrentes voies de signalisation associes la rgression de lHVG et la performance cardiaque. Des rats spontanment hypertendus (SHR, 12 semaines) ont reu de la moxonidine 0, 100 et 400 g/kg/h, pour une priode de 1 et 4 semaines, via des mini-pompes osmotiques implantes dune faon sous-cutane. Aprs 4 semaines de traitement, la performance cardiaque a t mesure par cho-doppler. Les rats ont ensuite t euthanasis, le sang a t recueilli pour mesurer les concentrations des cytokines plasmatiques et les curs ont t prlevs pour la dtermination histologique du dpt de collagne et de l'expression des protines de signalisation dans le ventricule gauche. Le traitement de 4 semaines na eu aucun effet sur les paramtres systoliques mais a permis damliorer les paramtres diastoliques ainsi que la performance cardiaque globale. Par rapport au vhicule, la moxonidine (400 g/kg/h) a permis daugmenter transitoirement la concentration plasmatique de lIL-1 aprs une semaine et de rduire la masse ventriculaire gauche. De mme, on a observ une diminution du dpt de collagne et des concentrations plasmatiques des cytokines IL-6 et TNF-, ainsi quune diminution de la phosphorylation de p38 et dAkt dans le ventricule gauche aprs 1 et 4 semaines de traitement, et cela avec une rduction de la pression artrielle et de la frquence cardiaque. Fait intressant, les effets anti-hypertrophiques, anti-fibrotiques et anti-inflammatoires de la moxonidine ont pu tre observs avec la dose sous-hypotensive (100 g/kg/h). Ces rsultats suggrent des effets cardiovasculaires bnfiques de la moxonidine associs une amlioration de la performance cardiaque, une rgulation de l'inflammation en diminuant les niveaux plasmatiques des cytokines pro-inflammatoires ainsi quen inhibant la MAPK p38 et Akt, et nous permettent de suggrer que, outre l'inhibition du SNS, moxonidine peut agir sur des sites priphriques.
Resumo:
Lobjectif central de cette thse de Doctorat tait dinvestiguer les dysfonctions mitochondriales qui surviennent prcocement au cours de la phase compense du remodelage ventriculaire pathologique et qui pourraient jouer un rle causal dans la progression vers linsuffisance cardiaque. Nos travaux antrieurs, raliss laide dun modle de surcharge volumique chronique induite par une fistule aorto-cavale (ACF) chez le Rat WKHA, ont montr quau cours du remodelage ventriculaire, les mitochondries dveloppaient une vulnrabilit louverture du pore de permabilit transitionnelle (PTP : un lment cl de la signalisation de la mort cellulaire) [1]. Ceci tait observable au stade compens du remodelage en absence des dysfonctions mitochondriales majeures typiquement observes dans le cur insuffisant. Ces rsultats nous ont amens suggrer que la vulnrabilit louverture du PTP pourrait constituer un mcanisme prcoce favorisant la progression de la cardiopathie. Dans ltude 1 de cette thse, nous avons tent de tester cette hypothse en induisant une ACF chez deux souches de rats affichant de trs nettes diffrences au niveau de la propension dvelopper linsuffisance cardiaque : les souches WKHA et Sprague Dawley (SD). Nos tudes in vitro sur organelles isoles et in situ sur lorgane entier ont permis de confirmer que, dans le cur ACF, les mitochondries dveloppent une vulnrabilit louverture du PTP et lactivation de la voie mitochondriale de la mort cellulaire lorsquexposes des stress pertinents la pathologie (surcharge calcique, ischmie-reperfusion [I-R]). Cependant, bien que comparativement aux animaux WKHA, les animaux SD dmontraient un remodelage ventriculaire plus rapide et prononc et une progression prcoce vers linsuffisance cardiaque, aucune diffrence ntait observable entre les deux groupes au niveau des dysfonctions mitochondriales, suggrant quelles ne sont pas lorigine de la progression plus rapide de la pathologie chez la souche SD, tout le moins en rponse la surcharge volumique. Nous avons par la suite dtermin, laide des mmes approches exprimentales, si cette vulnrabilit mitochondriale tait observable dans une cardiopathie dtiologie diffrente, plus spcifiquement celle qui est associe la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD), une maladie gntique cause par une mutation de la protine dystrophine. Nos tudes menes (tudes 2-4) sur de jeunes souris mdx (le modle murin de la DMD) exemptes de tout signe clinique de cardiopathie nont rvl aucune diffrence au niveau des fonctions mitochondriales de base. Cependant, tout comme dans le modle dACF, les mitochondries dans le cur de souris mdx taient significativement plus vulnrables louverture du PTP lorsque soumises une I-R (tude 2). Par ailleurs, nous avons dmontr que ladministration aigu de sildnafil aux souris mdx induisait une abolition de louverture du PTP et de ses consquences signaltiques, une diminution marque du dommage tissulaire et une meilleure rcupration fonctionnelle la suite de lI-R (tude 3). Nous avons ensuite test chez la souris mdx ladministration aigu de SS31, un peptide anti-oxydant cibl aux mitochondries, cependant aucun effet protecteur na t observ, suggrant que le tamponnement des radicaux libres est dune utilit limite si les perturbations de lhomostasie calcique typiques cette pathologie ne sont pas traites simultanment (tude 4). Globalement, les travaux effectus au cours de cette thse dmontrent que la vulnrabilit louverture du PTP constitue une dysfonction prcoce et commune qui survient au cours de remodelages ventriculaires pathologiques dtiologies diffrentes. Par ailleurs, ces travaux suggrent des stratgies dintervention pharmacologiques ciblant ce processus, dont lefficacit pour la prvention de linsuffisance cardiaque demande tre tablie.
Resumo:
Le cartilage est un tissu conjonctif compos dune seule sorte de cellule nomme chondrocytes. Ce tissu offre une fondation pour la formation des os. Les os longs se dveloppent par l'ossification endochondral. Ce processus implique la coordination entre la prolifration, la diffrenciation et l'apoptose des chondrocytes, et rsulte au remplacement du cartilage par l'os. Des anomalies au niveau du squelette et des dfauts lis lge tels que larthrose (OA) apparaissent lorsquil y a une perturbation dans lquilibre du processus de dveloppement. ce jour, les mcanismes exacts contrlant la fonction et le comportement des chondrocytes pendant la croissance et le dveloppement du cartilage sont inconnus. Le rcepteur activateur de la prolifration des peroxysomes (PPAR) gamma est un facteur de transcription impliqu dans l'homostasie des lipides. Plus rcemment, son implication a aussi t suggre dans l'homostasie osseuse. Cependant, le rle de PPAR in vivo dans la croissance et le dveloppement du cartilage est inconnu. Donc, pour la premire fois, cette tude examine le rle spcifique de PPAR in vivo dans la croissance et le dveloppement du cartilage. Les souris utilises pour ltude avaient une dltion conditionnelle au cartilage du gne PPAR. Ces dernires ont t gnres en employant le systme LoxP/Cre. Les analyses des souris ayant une dltion au PPAR aux stades embryonnaire et adulte dmontrent une rduction de la croissance des os longs, une diminution des dpts de calcium dans los, de la densit osseuse et de la vascularisation, un dlai dans lossification primaire et secondaire, une diminution cellulaire, une perte dorganisation colonnaire et une diminution des zones hypertrophiques, une dsorganisation des plaques de croissance et des chondrocytes dforms. De plus, la prolifration et la diffrenciation des chondrocytes sont anormales. Les chondrocytes et les explants isols du cartilage mutant dmontrent une expression rduite du facteur de croissance endothlial vasculaire (VEGF)-A et des lments de production de la matrice extracellulaire. Une augmentation de lexpression de la mtalloprotinase matricielle (MMP)-13 est aussi observe. Dans les souris ges ayant une dltion au PPAR, y est aussi not des phnotypes qui ressemblent ceux de lOA tel que la dgradation du cartilage et l'inflammation de la membrane synoviale, ainsi quune augmentation de lexpression de MMP-13 et des nopitopes gnrs par les MMPs. Nos rsultats dmontrent que le PPAR est ncessaire pour le dveloppement et lhomostasie du squelette. PPAR est un rgulateur essentiel pour la physiologie du cartilage durant les stades de croissance, de dveloppement et de vieillissement.
Resumo:
Bien que le changement dans le choix des substrats nergtiques des acides gras (AGs) vers les glucides soit considr comme bnfique pour le cur insuffisant, il nest pas clair savoir pourquoi les patients atteints de dsordres de la -oxydation (-OX) des AGs chane longue (AGCLs) dveloppent des troubles du rythme et des cardiomyopathies. De plus, le traitement actuel ne permet pas de prvenir lapparition du phnotype clinique chez tous les patients, spcifiquement en condition de jene ou de stress. Ainsi, plusieurs modles de souris dficientes pour des enzymes impliques dans loxydation des acides gras ont t dvelopps de manire amliorer les connaissances de la maladie ainsi que les traitements offerts aux patients. cet gard, cette tude vise valuer le phnotype mtabolique et fonctionnel des curs de souris dficientes pour le rcepteur activ de la prolifration des peroxysomes- (PPAR), un facteur de transcription des gnes impliqus notamment dans la -OX des AGs, et pour la dshydrognase des acyl-CoA trs longue chane (very-long chain acyl-CoA dehydrogenase, VLCAD), le dficit de loxydation des AGCLs le plus commun chez lhumain. Lapproche exprimentale utilise comprend plusieurs techniques dont (i) la perfusion ex vivo de cur de souris au travail combine lutilisation de substrats marqus au carbone 13 (13C) et lanalyse par chromatographie gazeuse-spectromtrie de masse (GCMS), (ii) lanalyse de lexpression gnique par qPCR et (iii) lanalyse de lactivit lectrique du cur in vivo par tlmtrie. De manire inattendue, les rsultats de cette tude mene chez la souris ont permis de mettre en vidence que des dficits pour des protines impliques dans loxydation des AGCLs sont associs des altrations du mtabolisme (i) des glucides, (ii) des AGs polyinsaturs (AGPIs), et (iii) mitochondrial, incluant lanaplrose, en plus dtre lis des dsordres de la fonction lectrique du cur, savoir une prolongation du segment QTc. Pris dans leur ensemble, les rsultats de cette thse pourraient servir llaboration de nouvelles interventions mtaboliques destines amliorer les traitements possibles et donc, la qualit de vie des patients atteints de dsordres hrditaires de la -OX des AGCLs.
Resumo:
L'endothline-1 (ET-1) et l'angiotensine II (Ang II) jouent un rle important dans le maintien de la pression artrielle et l'homostasie vasculaire. Une activit accrue de ces peptides vasoactifs est prsume contribuer au dveloppement de pathologies vasculaires, telles que l'hypertension, l'athrosclrose, l'hypertrophie et la restnose. Ceci est caus par une activation excessive de plusieurs voies de signalisation hypertrophiques et prolifratives, qui incluent des membres de la famille des Mitogen Activated Protein Kinases (MAPK), ainsi que la famille phosphatidylinositol 3-kinase (PI3-K) / protine kinase B (PKB). Bien que l'activation de ces voies de signalisation soit bien lucide, les lments en amont responsables de l'activation des MAPK et de la PKB, induite par l'ET-1 et Ang II, demeurent mal compris. Durant les dernires annes, le concept de la transactivation de rcepteurs et/ou non-rcepteurs protines tyrosine kinases (PTK) dans le dclenchement des vnements de signalisation induits par les peptides vasoactifs a gagn beaucoup de reconnaissance. Nous avons rcemment dmontr que la PTK Insulin-like Growth Factor type-1 Receptor (IGF-1R) joue un rle dans la transduction des signaux induits par lH2O2, menant la phosphorylation de la PKB. tant donn que les peptides vasoactifs gnrent des espces ractives d'oxygne, telles que lH2O2 lors de leur signalisation, nous avons examin le rle de dIGF-1R dans la phosphorylation de la PKB et les rponses hypertrophiques dans les cellules muscle lisse vasculaires (CMLV) induites par l'ET-1 et Ang II. AG-1024, un inhibiteur spcifique de l'IGF-1R, a attnu la phosphorylation de la PKB induite la fois par l'ET-1 et Ang II. Le traitement des CMLVs avec lET-1 et Ang II a galement induit une phosphorylation des rsidus tyrosine dans les sites d'autophosphorylation d'IGF-1R, celle-ci a t bloque par lAG-1024. En outre, lET-1 et lAng II on tous les deux provoqu la phosphorylation de c-Src, une PTK non-rcepteur, bloqu par PP-2, inhibiteur spcifique de la famille Src. La PP-2 a galement inhib la phosphorylation de PKB et dIGF-1R induite par lET-1 et lAng II. De plus, la synthse de protines ainsi que dADN, marqueurs de la prolifration cellulaire et de l'hypertrophie, ont galement t attnue par lAG-1024 et le PP-2. Bien que ce travail dmontre le rle de c-Src dans la phosphorylation PKB induite par l'ET-1 et Ang II, son rle dans l'activation des MAPK induit par l'ET-1 dans les CMLVs reste controvers. Par consquent, nous avons examin l'implication de c-Src dans l'activation de ERK 1/2, JNK et p38MAPK, par l'ET-1 et Ang II, ainsi que leur capacit rgulariser l'expression du facteur de transcription Early growth transcription factor-1 Egr-1 . ET-1 et Ang II ont induit la phosphorylation de ERK 1/2, JNK et p38 MAPK, et ont amplifi l'expression d'Egr-1 dans les CMLVs. Cette augmentation de la phosphorylation des MAPK a t diminue par la PP-2, qui a aussi attnu l'expression d'Egr-1 induite par l'ET-1 et l'Ang II. Une preuve supplmentaire du rle de c-Src dans ce processus a t obtenue en utilisant des fibroblastes embryonnaires de souris dficientes en c-Src (Src -/- MEF). L'expression d'Egr-1, ainsi que l'activation des trois MAPKs par l'ET-1 ont t attnues dans les cellules Src -/- par rapport au MEF exprimant des taux normaux Src. En rsum, ces donnes suggrent que l'IGF-1R et c-Src PTK jouent un rle essentiel dans la rgulation de la phosphorylation de PKB et des MAPK dans lexpression d'Egr-1, ainsi que dans les rponses hypertrophiques et prolifratives induites par l'ET-1 et Ang II dans les CMLVs.
Resumo:
Thse ralise en cotutelle avec l'Universit Pierre et Marie Curie, Paris 6(UPMC, Paris, France).
Resumo:
La fibrillation auriculaire (FA) est le trouble du rythme le plus frquemment observ en pratique clinique. Elle constitue un risque important de morbi-mortalit. Le traitement de la FA reste un dfi majeur en lien avec les nombreux effets secondaires associs aux approches thrapeutiques actuelles. Dans ce contexte, une meilleure comprhension des mcanismes sous-jacents la FA est essentielle pour le dveloppement de nouvelles thrapies offrant un meilleur rapport bnfice/risque pour les patients. La FA est caractrise par i) un remodelage lectrique dltre associ le plus souvent ii) un remodelage structurel du myocarde favorisant la rcurrence et le maintien de larythmie. La diminution de la priode rfractaire effective au sein du tissu auriculaire est un lment clef du remodelage lectrique. Le remodelage structurel, quant lui, se manifeste principalement par une fibrose tissulaire qui altre la propagation de linflux lectrique dans les oreillettes. Les mcanismes molculaires impliqus dans la mise en place de ces deux substrats restent mal connus. Rcemment, le rle des microARNs (miARNs) a t point du doigt dans de nombreuses pathologies notamment cardiaques. Dans ce contexte les objectifs principaux de ce travail ont t i) d'acqurir une comprhension approfondie du rle des miARNs dans la rgulation de lexpression des canaux ioniques et ii) de mieux comprendre le rle de ces molcules dans linstallation dun substrat favorable a la FA. Nous avons, dans un premier temps, effectu une analyse bio-informatique combine des approches exprimentales spcifiques afin didentifier clairement les miARNs dmontrant un fort potentiel de rgulation des gnes codant pour lexpression des canaux ioniques cardiaques humains. Nous avons identifi un nombre limit de miARNs cardiaques qui possdaient ces proprits. Sur la base de ces rsultats, nous avons dmontr que laltration de l'expression des canaux ioniques, observe dans diverse maladies cardiaques (par exemple, les cardiomyopathies, lischmie myocardique, et la fibrillation auriculaire), peut tre soumise ces miARNs suggrant leur implication dans larythmognse. La rgulation du courant potassique IK1 est un facteur dterminant du remodelage lectrique auriculaire associe la FA. Les mcanismes molculaires sous-jacents sont peu connus. Nous avons mis lhypothse que l'altration de lexpression des miARNs soit corrle laugmentation de lexpression dIK1 dans la FA. Nous avons constat que lexpression de miR-26 est rduite dans la FA et quelle rgule IK1 en modulant lexpression de sa sous-unit Kir2.1. Nous avons dmontr que miR-26 est sous la rpression transcriptionnelle du facteur nuclaire des lymphocytes T activs (NFAT) et que lactivit accrue de NFATc3/c4, aboutit une expression rduite de miR-26. En consquence IK1 augmente lors de la FA. Nous avons enfin dmontr que linterfrence in vivo de miR-26 influence la susceptibilit la FA en rgulant IK1, confirmant le rle prpondrant de miR-26 dans le remodelage auriculaire lectrique. La fibrose auriculaire est un constituant majeur du remodelage structurel associ la FA, impliquant l'activation des fibroblastes et linflux cellulaire du Ca2 +. Nous avons cherch dterminer i) si le canal permable au Ca2+, TRPC3, jouait un rle dans la fibrose auriculaire en favorisant l'activation des fibroblastes et ii) tudi le rle potentiel des miARNs dans ce contexte. Nous avons dmontr que les canaux TRPC3 favorisent linflux du Ca2 +, activant la signalisation Ca2 +-dpendante ERK et en consquence activent la prolifration des fibroblastes. Nous avons galement dmontr que lexpression du TRPC3 est augmente dans la FA et que le blocage in vivo de TRPC3 empche le dveloppement de substrats relis la FA. Nous avons par ailleurs valid que miR-26 rgule les canaux TRPC3 en diminuant leur expression dans les fibroblastes. Enfin, nous avons montr que l'expression rduite du miR-26 est galement due lactivit augmente de NFATc3/c4 dans les fibroblastes, expliquant ainsi laugmentation de TRPC3 lors de la FA, confirmant la contribution de miR-26 dans le processus de remodelage structurel li la FA. En conclusion, nos rsultats mettent en vidence l'importance des miARNs dans la rgulation des canaux ioniques cardiaques. Notamment, miR-26 joue un rle important dans le remodelage lectrique et structurel associ la FA et ce, en rgulant IK1 et lexpression du canal TRPC3. Notre tude dmasque ainsi un mcanisme molculaire de contrle de la FA innovateur associant des miARNs. miR-26 en particulier reprsente apres ces travaux une nouvelle cible thrapeutique prometteuse pour traiter la FA.
