Clonagem e sequenciamento parcial do gene co-i de varroa destructor haplótipo J: um método de apoio à caracterização molecular


Autoria(s): Azambuja, Ananda Thomazetti
Contribuinte(s)

Boldo, Juliano Tomazzoni

Tresbach, Rafael Hencke

Data(s)

23/01/2017

23/01/2017

07/12/2016

Resumo

As abelhas melíferas são insetos polinizadores fundamentais para os ecossistemas e relevantes economicamente. Através do seu manejo relativamente simples e barato, a exploração de seus produtos, principalmente o mel, torna a atividade apícola bastante rentável para o produtor rural. A redução das populações de Apis mellifera tem sido registrada em inúmeros países. Grande parte dos relatos tem sido associados ao fenômeno chamado Colony Collapse Disorder (CCD), um somatório de condições adversas que inclui patógenos, parasitos e doses sub-letais de agroquímicos, culminando com o abandono das colmeias. No Brasil, a CCD é menos observada e os relatos de perdas de colônias no país tem sido mais associados ao envenenamento acidental. Contudo, é preciso evidenciar a presença de tais patógenos e parasitos nas colmeias brasileiras. Um dos fatores relacionados ao desaparecimento das abelhas é o ectoparasito Varroa destructor. O parasito, além de ser vetor de patógenos, como bactérias e vírus, é um ácaro que também suga a hemolinfa de larvas e abelhas adultas, afetando seu desenvolvimento e diminuindo o tempo de vida. Em razão disso, o ácaro citado é considerado uma ameaça à apicultura mundial. Dessa forma, identificar os diferentes haplótipos, diretamente relacionados com o vigor reprodutivo da espécie de uma determinada região, é fundamental para a implementação de programas de controle. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo estabelecer, dentro do Grupo de Pesquisa APIPAMPA, o método para a identificação do haplótipo J de V. destructor. Para tal, foi realizada a clonagem e o sequenciamento parcial de um fragmento de 458 pb do gene mitocondrial Citocromo C Oxidase subunidade I (co-I) de V. destructor. O fragmento foi amplificado por PCR, utilizando os primers COXF [5´GG(A/G)GG(A/T)GA(C/T)CC(A/T)ATT(C/T)T(A/T)TATCAAC3´] e COXR [5´GG(A/T)GACCTGT(A/TA(A/T)AATAGCAAATAC3´], purificado e clonado. Posteriormente à clonagem e transformação, o fragmento foi sequenciado. A sequência obtida foi depositada no banco de dados do National Center for Biotechnology Information (NCBI) sob número de acesso KX458253. Os resultados do sequenciamento possibilitaram a confirmação da identidade do haplótipo J de V. destructor comparando o alinhamento da sequência nucleotídica obtida com sequências já publicadas por outros autores. Os dados alcançados no presente trabalho permitem aos próximos pesquisadores utilizarem um método adequado para identificação do haplótipo J de V. destructor nos laboratórios do Grupo de Pesquisa APIPAMPA com uma maior precisão, possibilitando o acompanhamento da flutuação deste haplótipo em apiários infestados.

Honey bees are fundamental pollinator insects ecosystems and economically relevant. Through its relatively simple and inexpensive handling, the exploitation of its products, mainly honey, makes beekeeping quite profitable for the rural producer. Reduction of populations of Apis mellifera has been registered in many countries. Most of the reports have been associated with the phenomenon called Colony Collapse Disorder (CCD), a sum of adverse conditions including pathogens, parasites and sub-lethal doses of agrochemicals, culminating in the abandonment of hives. In Brazil, CCD is less observed and the reports of losses of colonies in the country have been more associated with accidental poisoning. However, is necessary evidence the presence of such pathogens and parasites in Brazilian hives. One of factors related to the disappearance of bees is the Varroa destructor ectoparasite. The parasite, besides being a vector of pathogens, such as bacteria and viruses, also sucks the hemolymph of adult bees and larvae, affecting its development and shortening life span. Because of this, the cited mite is considered a threat to worldwide beekeeping. In this way, identification of the different haplotypes, directly related to the reproductive vigor of species, from a given region is fundamental for implementation of control programs. Within this context, this work aimed to establish, within APIPAMPA Research Group, the method for identification of V. destructor J haplotype. To this end, cloning and partial sequencing of a 458 bp fragment of the mitochondrial gene Cytochrome C Oxidase subunit I (co-I) from V. destructor was performed. The fragment was amplified by PCR, using the COXF primers[5´GG(A/G)GG(A/T)GA(C/T)CC(A/T)ATT(C/T)T(A/T)TATCAAC3´] and COXR [5´GG(A/T)GACCTGT(A/TA(A/T)AATAGCAAATAC3´], purified and cloned. Subsequent to cloning and transformation, the fragment was sequenced. Sequence obtained was deposited in the database of the National Center for Biotechnology Information (NCBI) under accession number KX458253. Sequencing results enabled the confirmation of the identity of V. destructor J haplotype by comparing the alignment of nucleotide sequence obtained with sequences already published by other authors. The data obtained in the present work allow next researchers to use a suitable method to identify the V. destructor J haplotype in APIPAMPA Research Group laboratories with greater accuracy, allowing the monitoring of the fluctuation of this haplotype in infested apiaries.

Identificador

http://hdl.handle.net/riu/733

Idioma(s)

pt_BR

Publicador

Universidade Federal do Pampa

Direitos

Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil

http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/

Palavras-Chave #Abelhas #Apicultura #Infestações por ácaros #Bees #Beekeeping #Infestations of mites
Tipo

Monograph