VIRULENCE GENE DETECTION AND EXPRESSION IN STREPTOCOCCUS DYSGALACTIAE SUBSP. DYSGALACTIAE STRAINS AND EVALUATION OF INFECTION POTENTIAL

Streptococcus dysgalactiae subsp. dysgalactiae (SDSD) é considerado um agente patogénico animal exclusivo e Streptococcus pyogenes (GAS) um agente patogénico humano exclusivo. Recentemente foram encontrados fatores de virulência fágicos de GAS em estirpes de SDSD de origem bovina e casos de infeção humana associada a SDSD têm vindo a ser reportados. Em consequência, o potencial zoonótico de SDSD foi sugerido, contudo o papel destes fatores de virulência na patogénese de SDSD não foi comprovado. Um dos objetivos desta tese foi detetar a presença e expressão de fatores de virulência de GAS, entre isolados de SDSD contemporâneos de origem portuguesa, isolados de amostras de leite de bovinos disgnosticados com mastite em herdades leiteiras portuguesas entre 2011-13 e comparar estes dados com os reportados de uma coleção portuguesa de SDSD previamente estudada de 2002-03. O potencial de infeção in vitro e in vivo foi também avaliado e comparado entre coleções. Determinantes genéticos de GAS (os genes de virulência speB, speC, speF, speH, speK, speL, speM, smeZ, spd1, sdn e o elemento quimérico Tn1207.3/Φ10394.4) foram pesquisados por PCR e a sua expressão averiguada por PCR após síntese de cDNA. A produção de DNases extracelulares foi avaliada e correlacionada com o perfil genotipico dos genes spd1 e sdn. Para estudar o potencial de infeção, in vitro, foram utilizadas linhas celulares repiratórias normais e tumorais humanas (BTEC e Detroit 562, respetivamente) e in vivo, o modelo animal zebrafish. Os resultados sugerem que os fatores de virulência pesquisados são característicos de SDSD de origem bovina e a produção de DNases extracelulares é independente dos genes spd1 e sdn. Os estudos de infeção in vitro e in vivo revelam que os potenciais de infeção de SDSD são específicos de estirpe e independentes dos genes de virulência pesquisados. O potencial zoonótico de SDSD é novamente sugerido uma vez que estirpes de origem bovina foram capazes de infetar linhas celulares humanas e o zebrafish.