Efeito da oxigenação hiperbárica no reparo ósseo de ratos diabéticos

The chronic state of hyperglycemia due to diabetes mellitus affects multiples organs impairing life quality. In bone, diabetes alters strength and mineral density and also suppresses the osteoblast activity, leading to an unbalanced bone healing process. Hyperbaric oxygen therapy (HBO) is suggested as an adjuvant treatment to accelerate bone repair. This study evaluated the effects of HBO in the number of mast cells and in new bone formation at the initial stage of bone repair in normoglycemic and diabetic rats. It was hypothesized that HBO treatment may improve bone repair in diabetic bone. The rats were equally divided in four groups: Control (C); Control + HBO (CH); Diabetes (D) and Diabetes + HBO (DH). Diabetes was induced by streptozotocin (65mg/kg) and femoral bone defects were created thirty days after diabetes induction in all groups. HBO initiated immediately after surgery procedure and was performed daily, for 7 days, in the CH e DH groups. Seven days after surgery, all animals were euthanized. The femur diaphyses were removed, fixated, decalcified and processed for paraffin embedding. The semi-serial histological sections obtained were stained with Hematoxylin-Eosin (HE), Mallory Trichrome and Toluidine Blue. The qualitative analysis was conducted in the histology slides stained with HE, where it was evaluated the morphological aspects of bone repair in the lesion area, observing the presence of clot, inflammatory cells, granulation tissue, type of bone tissue, morphology of bone cells, and thickness and organization of bone trabeculae. In the slides stained with Mallory Trichrome and Toluidine Blue were evaluated the percentage of new bone formation and number of mast cells, respectively. The qualitative analysis showed that the CH group presented a more advanced stage of bone repair compared to the C group, showing thicker trabeculae and greater bone filling of the lesion area. In D and DH group, the lesion area was partially filled with new bone formation tissue and presented thinner trabeculae and fewer areas associated to osteoclasts compared to control group. The histomorphometric analysis showed a significant improvement in new bone formation (p<0.001) comparing CH (38.08 ± 4.05) and C (32.05 ± 5.51); C and D (24.62 ± 2.28 and CH and DH (27.14 ± 4.21) groups. In the normoglycemic rats there was a significant increasing in the number of mast cells (p<0.05) comparing C (8.06 ± 5.15) and CH (21.06 ± 4.91) groups. In conclusion, this study showed that diabetes impaired bone repair and HBO was only able to increase new bone formation and the number of mast cells in the normoglycemic animals.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais

Dissertação (Mestrado)

A hiperglicemia crônica decorrente do diabetes mellitus afeta múltiplos órgãos interferindo na qualidade de vida. No osso, esse quadro altera a resistência e a densidade mineral óssea, além de suprimir a atividade dos osteoblastos, levando a um desequilíbrio no processo de reparo ósseo. A oxigenoterapia hiperbárica (HBO) é sugerida como tratamento adjuvante para aceleração do reparo ósseo. O presente estudo avaliou os efeitos da HBO na quantidade de mastócitos e na neoformação óssea em estágio inicial do reparo ósseo em ratos diabéticos e normoglicêmicos. A hipótese do estudo foi que a HBO poderia melhorar o reparo ósseo em osso de indivíduo diabético. Os animais foram divididos em quatro grupos iguais: Controle (C); Controle + HBO (CH); Diabetes (D) e Diabetes + HBO (DH). O diabetes foi induzido com estreptozotocina (65mg/kg) e trinta dias após a indução foram criados defeitos ósseos nos fêmures de todos animais. A HBO iniciou-se imediatamente após o procedimento cirúrgico, sendo realizada diariamente por 7 dias, nos grupos CH e DH. Sete dias após a cirurgia, todos os animais foram submetidos à eutanásia. As diáfises dos fêmures foram removidas, fixadas, desmineralizadas e processadas para inclusão em parafina. Os cortes semi-seriados obtidos foram corados em Hematoxilina-Eosina (HE), Tricrômico de Mallory e Azul de Toluidina. Nos cortes em HE foi realizada análise qualitativa, onde foram avaliados os aspectos morfológicos do reparo ósseo na área da lesão, observando presença de coágulo, células inflamatórias e tecido de granulação, além de tipo de tecido ósseo, morfologia das células e organização e espessura das trabéculas ósseas. Nos cortes em Tricrômico de Mallory e Azul de Toluidina foram obtidas porcentagem de matriz óssea neoformada e quantidade de mastócitos, respectivamente. A análise qualitativa mostrou que o grupo CH apresentou estágio mais avançado de reparação óssea comparado ao grupo C, apresentando trabéculas ósseas mais espessas e maior preenchimento ósseo na área da lesão. Nos grupos D e DH a lesão mostrou-se parcialmente preenchida com tecido ósseo neoformado, com trabéculas mais finas e poucas áreas associadas a osteoclastos, em comparação ao grupo controle. A análise histomorfométrica, mostrou aumento significativo na neoformação óssea (p<0,001) comparando os grupos CH (38,08 ± 4,05) e C (32,05 ± 5,51); C e D (24,62 ± 2,28) e CH e DH (27,14 ± 4,21). Nos animais normoglicêmicos houve aumento significativo da quantidade de mastócitos (p<0,05) comparando os grupos C (8,06 ± 5,15) e CH (21,06 ± 4,91). Em conclusão, este estudo demonstrou que o diabetes comprometeu a reparação óssea e que a oxigenoterapia hiperbárica foi capaz de aumentar a neoformação óssea e a quantidade de mastócitos apenas em animais normoglicêmicos.