Clonagem e expressão da região P1 da protéina VP1 de sapovirus

As infecções gastrointestinais causam grande impacto social e econômico no mundo inteiro, em especial aos países em desenvolvimento por serem endêmicas, contribuírem com a desnutrição e aumentarem o risco de morte em crianças menores de cinco anos. Entre os microrganismos causadores de gastroenterites, os vírus são os de maior envolvimento, normalmente relacionados com surtos originados de água e/ou comida contaminadas. O Sapovirus é um agente etiológico das doenças diarreicas que pertence à família Caliciviridae. Está associado principalmente a surtos em enfermarias, orfanatos e escolas. Este trabalho objetiva a clonagem e expressão da proteína P1 em sistema bacteriano com fins futuros de desenvolvimento de anticorpos para uso diagnóstico. Com o gene codificante da proteína P1, de 600pb, foi realizada uma clonagem em plasmídeo (pENTR-2b) depois uma subclonagem num vetor de expressão (pDEST17) usando o sistema Gateway, todas reações positivaram, e foram confirmadas pelo sequenciamento dos plasmídeos. Em seguida a indução da expressão com L-arabinose foi realizada e foram coletadas as alíquotas. Estas alíquotas foram corridas em gel de poliacrilamida revelando bandas de 20kDa, mais intensas com 4 horas de indução, nos pellets. Estes mesmos pellets foram submetidos ao teste de Western blot, com anticorpos anti-HisTag para ligação específica com a proteína de interesse; O resultado obtido foi favorável, mostrando reação apenas na banda de 20kDa, o tamanho esperado da proteína. O Sapovírus está aumentando de forma expressiva seu reconhecimento em surtos diarreicos no mundo todo, tornando necessária uma técnica confiável, simples e com custo efetivo razoável para uso diagnóstico na rotina laboratorial.

Biomedicina