Ação do extrato de glândulas salivares de fêmeas do carrapato Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) sobre a inibição da proliferação de células de linhagem tumoral

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Processo FAPESP: 2013/00654-0

Pós-graduação em Ciências Biológicas (Biologia Celular e Molecular) - IBRC

Ticks, hematophagous ectoparasites produces saliva that presents molecules capable of modulating the immune-inflammatory and hemostatic system of the host. The present study was performed to characterize the salivary gland extract of female Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) fed for four days in rabbits by mass spectrometry (LCMS-IT-TOF) by shotgun strategy, which identified 14 proteins with diverse functions: as structural components of cell junctions, cytoskeleton, the nucleosome, and protein with anticoagulant and antiinflammatory actions corroborating data in the literature. In this study, we attempted to also examine the antitumor potential of this extract on tumor cell lines SK HEP-1 and HEP-G2, by MTT assay; analysis by Laser Scanning Confocal Microscopy techniques, and pattern analysis of mRNA transcription involved in cell death by apoptosis, including the products of genes Bax, Bcl-2, Caspases 3 and 9 Fas and Interleukin-1 α. The results showed that the extract obtained in concentration of 50 μg/ml significantly inhibited the proliferation of both cell lines tested. In the analysis of cores and actin filaments, of the treated cells were not observed morphological characteristics that indicate cell death processes by apoptosis. The analysis of the pattern of transcription of mRNAs involved in mechanisms of cell death by apoptosis, showed a significant expression of some apoptotic genes, in treated cells compared to the control group, suggesting that the action of the extract can cause an unbalance homeostasis in the cell, which can trigger processes of cell death by apoptosis, confirming the data presented in the literature

Os carrapatos, ectoparasitas hematófagos, produzem uma saliva em cuja composição encontram-se moléculas capazes de modular o sistema imuneinflamatório e hemostático do hospedeiro. No presente estudo, foi realizada a caracterização do extrato de glândulas salivares de fêmeas do carrapato Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) alimentadas por quatro dias em coelhos hospedeiros, por meio de espectrometria de massas (LCMS-IT-TOF) pela estratégia de Shotgun, que identificou 14 proteínas, com as mais diversas funções como componentes estruturais de junções celulares, do citoesqueleto, do nucleossomo, além de proteínas com ações anticoagulante e anti-inflamatória corroborando os dados presentes na literatura. Neste trabalho buscou-se, ainda, analisar o potencial antitumoral desse extrato em células das linhagens tumorais SK-HEP-1 e HEP-G2, por meio de ensaios de MTT; análise, por técnicas de Microscopia de Confocal de Varredura a Laser, do núcleo e citoesqueleto; e análise do padrão de transcrição de mRNAs envolvidos nos eventos ou mecanismos de morte celular por apoptose, incluindo os produtos dos genes Bax, Bcl-2, Caspases 3 e 9, Fas e Interleucina 1 α. Os resultados obtidos mostraram que o extrato na concentração de 50 μg/mL inibiu significativamente a proliferação celular das duas linhagens testadas. Pela análise dos núcleos e filamentos de actina das células expostas, não foram verificadas características morfológicas que indicassem processos de morte celular por apoptose. Já a análise do padrão de transcrição de mRNAs envolvidos nos mecanismos de morte celular por apoptose, evidenciou a expressão significativa de alguns genes anti e pró-apotóticos nas células tratadas quando comparadas às do grupo controle, sugerindo que a ação do extrato pode causar o desbalanço na homeostase celular, que pode desencadear processos de morte celular por apoptose, corroborando os dados apresentados na...