Uso do spoligotyping para genotipagem de Mycobacterium tuberculosis obtidos a partir de lâminas coradas pela técnica de ziehl-neelsen pertencentes a pacientes com tuberculose pulmonar residentes nos municípios paraenses de Belém e Ananindeua, Pará, Brasil

A tuberculose (TB) é um grande problema de saúde pública, intimamente ligada aos fatores sócio-econômicos, e tem como principal agente etiológico o Mycobacterium tuberculosis. O Spoligotyping é uma técnica baseada em PCR-hibridização reversa que permite detectar e diferenciar simultaneamente membros do Complexo M. tuberculosis diretamente de amostras clínicas, como em amostras obtidas de lâminas de Ziehl-Neelsen (ZN), evitando problemas associados ao lento crescimento destes microrganismos, tornando-se assim uma importante ferramenta para o monitoramento de cepas em diferentes contextos epidemiológicos, sendo capaz de revelar o caráter biogeográfico destas. A possibilidade de caracterizar genética, demográfica e geograficamente estes microrganismos pode contribuir para o entendimento de como a doença é transmitida e para a implementação das ações para seu controle e combate. Desta forma, foi realizado um estudo retrospectivo que avaliou amostras obtidas a partir de lâminas coradas pela técnica de ZN, confeccionadas por laboratórios da rede pública dos municípios paraenses de Belém e Ananindeua entre outubro de 2007 e março de 2008. A maioria (61,3%) dos 163 casos incluídos no estudo pertencia ao gênero masculino e 68,0% dos casos tinham entre 20 e 49 anos, com média de idade de 38 anos. A aplicação do Spoligotyping neste tipo de amostras apresentou bom rendimento, com 146 (89,6%) padrões de hibridização completos e concordantes entre si após as duplicatas. Destes, 142 foram considerados para comparação com o banco de dados internacional de Spoligotyping (SpolDB4), dentre os quais foram observados 67 espoligotipos ou genótipos distintos, compreendendo 95 (67%) casos com padrões compartilhados por duas a 20 amostras e 47 (33%) casos com padrões únicos. Quarenta e oito (71,6%) genótipos eram conhecidos e 19 (28,4%) ainda não haviam sido relatados no SpolDB4. As famílias LAM e T foram as mais frequentes, concentrando 56 (39,4%) e 35 (24,6%) casos, respectivamente, e as famílias Haarlem e EAI compreenderam 12 (8,45%) amostras cada. A geolocalização dos casos permitiu visualizar a distribuição dos espoligotipos nos municípios estudados, evidenciando alguns agrupamentos com mesmo genótipo, mostrando-se útil para direcionar e auxiliar investigações futuras.

Tuberculosis (TB) is a major public health problem, closely linked to socioeconomic factors, and its main causative agent Mycobacterium tuberculosis. The Spoligotyping is based on PCR-reverse hybridization that permit identification and differentiation of M. tuberculosis Complex members directly from clinical samples, as samples from Ziehl-Neelsen stained slides (ZN), avoiding problems associated with slow growth of these microorganisms, thus becoming an important tool for the monitoring of strains in different epidemiological settings, being able to reveal the biogeographical character of these. The ability to characterize genetic, demographic and geographically these microorganisms can contribute both to understanding how the disease is transmitted and the implementation of actions to its control and combat. Thus, we performed a retrospective study that evaluated the samples obtained from ZN stained slides, made by public heath laboratories from Belém and Ananindeua between October 2007 and March 2008. Most (61.3%) of 163 cases included in the study belonged to the males and 68.0% of cases were between 20 and 49 years with a mean age of 38 years. Application of Spoligotyping in this kind of samples showed good performance, with 146 (89.6%) hybridization patterns of complete and consistent with each other after the duplicates. Of these, 142 were considered for comparison with the international database of Spoligotypes (SpolDB4), of which 67 were observed different spoligotype or genotypes, including 95 (67%) cases were shared by two to 20 samples and 47 (33%) with unique patterns. Forty-eight (71.6%) genotypes were known and 19 (28.4%) have not been reported in SpolDB4. LAM and T families were more frequent, concentrating 56 (39.4%) and 35 (24.6%) cases, respectively, and Haarlem, and EAI families comprised 12 (8.45%) samples each. Spatial localization of cases allowed to visualize the distribution of spoligotypes in the cities studied, revealing some groups with the same genotype, proving to be useful to guide and assist future investigations.