Morfogênese in vitro de nim a partir de explantes cotiledonares

Azadirachta indica A. Juss, popularmente conhecido como nim, é uma espécie arbórea que se destaca por possuir substâncias de ação inseticida, fungicida, bactericida e nematicida. Sementes de nim foram inoculadas em meio de cultura WPM (Wood Plant Medium) contendo diferentes concentrações de ácido giberélico (GA₃) (0; 3,0; 6,0; 9,0; e 12,0 mg L^-1). Após 30 dias, cotilédones obtidos a partir de plântulas germinadas in vitro foram inoculados em meio WPM suplementado com ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) (0,0; 1,0; 2,0; e 3,0 mg L^-1) e, ou, 6-benzilaminopurina (BAP) (0,0; 1,0; 2,0; e 3,0 mg L^-1). As culturas foram incubadas no escuro, a 28 ºC. Os calos formados foram avaliados com base na sua coloração e textura, e três subcultivos foram realizados mensalmente em meio WPM contendo 2,0 mg L^-1 BAP, na presença de luz. A cada 30 dias, avaliou-se o número de brotos formados a partir dos calos subcultivados. Entre os meios testados, o mais apropriado para germinação in vitro de nim foi o WPM na ausência de GA₃. Explantes cotiledonares cultivados em WPM suplementado com 2,0 mg L^-1 de BAP promoveram a maior formação de calos com potencial morfogênico. Quando esses calos foram transferidos para meio de composição similar, obteve-se alta formação de brotações até o terceiro subcultivo.

ABSTRACT: Azadirachta indica A. Juss, popularly known as neem, is a woody species widely used because of its insecticide, fungicide, bactericide, and nematicide properties. Seeds of neem were inoculated in WPM (Wood Plant Medium) containing different concentrations of gibberelic acid (GA₃) (0, 3, 6, 9, and 12 mg L^-1). After 30 days, cotyledons were inoculated in WPM supplemented with 0.0; 1.0; 2.0 and 3.0 mg L^-1 acid 2,4-phenoxyacetic acid (2,4-D) and/or 0.0; 1.0; 2.0 and 3.0 mg L^-1 6-benzylaminopurine (BAP). The cultures were kept in the dark at 28 ºC. Differentiated calli were evaluated based on their coloration and texture, and three subcultures were carried out on a monthly basis in WPM medium with 2.0 mg L^-1 BAP, in the presence of light. Every 30 days, the number of differentiated shoot-buds was evaluated. WPM medium lacking GA₃ promoted the highest in vitro seed germination indexes. Cotyledonary-derived explants cultured in WPM medium with 2.0 mg L^-1 BAP yielded calli with high morphogenic potential. When those calli were transferred to medium with similar composition, a high shoot formation was achieved up to the third subculture.