Desenvolvimento de um método para caracterização do extrato hidroetanólico das folhas de Mikania lindleyana DC por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE)

Mikania lindleyana DC (Asteraceae) é uma trepadeira arbustiva, perene, lenhosa e sem gavinhas, com caule volúvel, cilíndrico estriado, verde e ramoso. É utilizada na Amazônia como diurético, antiinflamatório, analgésico, anti-hipertensivo, antiulceroso. Este trabalho teve por objetivo desenvolver um método para caracterização do extrato hidroetanólico das folhas de M. lindleyana DC por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). O extrato hidroetanólico (tintura) preparado conforme a FARMACOPÉIA BRASILEIRA V, 2010 foi submetido, após secagem, a análise fitoquímica, por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e por CLAE. Na prospecção química, observou-se a presença de cumarinas, alcalóides, aminoácidos, açúcares redutores, fenóis, taninos, esteróides, terpenos, saponinas e ácidos orgânicos. Na análise das frações (hexânica, clorofórmica e acetato de etila), do extrato hidroetanólico bruto e da cumarina (1mg/mL) por CCD, utilizando como eluente tolueno/diclorometano/acetona (45:25:30) observou-se no UV (365nm) bandas fluorescentes de cor verde clara (Rf 0.61) características de cumarina. Na análise do extrato bruto e da fração clorofórmica por CLAE e uma solução metanólica de cumarina pura a 0,1 mg/mL, utilizando como eluente metanol/água (47:53), picos no Rt de cerca de 6.00 minutos foram observados correspondentes a espectro característico com máximos de absorção entre 270 nm e 300 nm. Os resultados demonstram a presença de cumarina em EHEB e FC. nas respectivas quantidades de 0,014 no EHEB e 0,209 na FC.

ABSTRACT: Mikania lindleyana DC (Asteraceae), vernacular “Sucuriju”, is a creeping, shrubby, perennial, evergreen plant, growing in the Amazon region where it is used as diuretic, anti-hypertensive, anti-inflammatory and anti-ulcerous medicine. The main aim of this study was to develop a method for characterization of hydro-ethanolic extract (tincture) from the leaves of M. lindleyana DC, using UV and High performance Liquid Chromatography (HPLC). The hydro-ethanolic extract (tincture) was prepared based on Brazilian Pharmacopeia V, 2010 and its dry residue was submitted to phytochemical analyses, Thin Layer Chromatography (TLC) and High Performance Liquid chromatography (HPLC). Among the substances observed in the phytochemical analysis was coumarin, alkaloids, amino acids, reducing sugars, phenols, tannins, steroids, terpenes, saponins and organic acids. TLC test was done by applying hexanic, chloroformic and ethyl acetate Fractions together with Crude hydro-ethanolic extract and aqueous solution of coumarin Aldrich^® 0,1mg/ml on the same plate using toluene/dichloromethane/acetone (45:25:30) as the eluent system. The chromatogram was then sprayed with an alcoholic solution of KOH 5%, and then observed under UV light at 254nm and 365 nm, revealing a light green band at an RF-0.61 for chloroformic fraction, crude hydro-ethanolic extract and for coumarin samples. The HPLC analysis was conducted using methanol/water 53:47 as the eluent system. The chloroformic fraction(CL), coumarin and the crude hydro-ethanolic extract (CHE) showed peaks at Retention time around 6.00minutes and spectra with maximum absorptions between 270nm and 300nm.This clearly demonstrate the presence of coumarins in the samples (CL= 0.209mg/mL and CHE= 0.014mg/mL).