Uso de antioxidantes para elevação da qualidade do sêmen criopreservado de búfalos (Bubalus bubalis)

O sêmen bubalino sofre com o processo de congelação que leva ao estresse oxidativo. O objetivo do trabalho foi desenvolver mecanismo de C de sêmen, com adição de substâncias antioxidantes, que permita reduzir a mortalidade espermática e as injúrias celulares, a fim de aumentar a potencial fertilidade do sêmen bubalino pós-descongelação. Foram utilizados 5 touros bubalinos da raça Murrah (4-8 anos). As coletas de sêmen foram realizadas pelo método de “vagina artificial. Os ejaculados foram aliquotados para congelação, configurando quatro tratamentos distintos: Grupo Controle - congelação com diluidor TESTRIS; Grupo Vitamina C - TES-TRIS associado à vitamina C (2,5 mM); Grupo Pentoxifilina - TES-TRIS com pentoxifilina (3,5 mM); e Grupo Vitamina C + Pentoxifilina - TES-TRIS com vitamina C (2,5 mM) e pentoxifilina (3,5 mM). Foram analisadas no sêmen in natura (Fase Pré-Congelação) o volume, pH, cor, aspecto, turbilhonamento, concentração do ejaculado, motilidade progressiva, vigor, integridade de membrana plasmática e morfologia espermática. Após os processos de congelação-descongelação (Fase Pós-Descongelação) e após o teste de termo-resistência (Fase Pós-TTR), as análises de motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e morfologia espermática foram realizadas. Os resultados foram analisados por ANOVA, Teste de Tukey e as correlações foram calculadas pelo teste de Pearson, com uso dos programas BioEstat 5.0 e SPSS 12. O nível de significância adotado foi de 5%. Houve diferença estatística significativa entre tratamentos para motilidade progressiva na Fase Pós- TTR (Controle: 15,1 ± 15,3%; Vitamina C: 25,6 ± 16,3%; Pentoxifilina: 23,3 ± 14,6 e Vitamina C + Pentoxifilina: 28,6 ± 16,2%; P<0,05). Para as demais características espermáticas, não houve diferença estatística significativa entre tratamentos (P>0,05). Dessa forma, , o uso do antioxidante vitamina C, isolado ou associado à pentoxifilina, no sêmen bubalino, pode aumentar sua potencial fertilidade e maximizar a disseminação de material genético superior.

ABSTRACT: The buffalo semen suffers with the freezing process, which leads to oxidative stress. The aim of the research was to develop mechanism of semen cryopreservation, based on the addition of antioxidants substances, in order to decrease sperm mortality and cellular damages, to shift buffalo semen quality after thawing and to disseminate superior genetic material. Five Murrah buffalo bulls were used (4-8 years) and semen collections were performed with artificial vagina method. Before freezing, ejaculates were divided into four treatments: Control Group – frozen semen with TES-TRIS; Ascorbic Acid Group – TES-TRIS added with ascorbic acid (2.5 mM); Pentoxifylline Group - TES-TRIS with pentoxifylline (3.5 mM); and Ascorbic Acid + Pentoxifylline Group - TES-TRIS with ascorbic acid (2.5 mM) and pentoxifylline (3.5 mM). Raw semen (Pre-Freezing Phase) was analyzed to volume, pH, color, aspect, mass activity, spermatic concentration, spermatic motility, vigor, plasma membrane integrity and spermatic morphology. After thawing (Post-Thawing Phase) and after the thermoresistance test (Post- TTR Phase), analyses of spermatic motility, vigor, plasma membrane integrity and spermatic morphology were realized. Results were analyzed by ANOVA, Tukey Test and correlations were calculated by Pearson Test, using for that BioEstat 5.0 and SPSS 12 statistical softwares. The level of significance adopted was 5%. Significant statistical difference were observed in relation to progressive spermatic motility in Post-TTR Phase (Control: 15.1 ± 15.3%; Ascorbic Acid: 25.6 ± 16.3%; Pentoxifylline: 23.3 ± 14.6 and Ascorbic Acid + Pentoxifylline: 28.6 ± 16.2%; P<0.05). The other spermatic characteristics showed no significant statistical difference between treatments (P>0.05). Thus, the use of ascorbic acid, isolate or associated to pentoxifylline, in the buffalo semen may increase the potential fertility and the dissemination of superior genetic material.