Ensaios estereológicos e morfologia tridimensional na formação hipocampal de aves migratórias marinhas: análise quantitativa da imunomarcação seletiva de neurônios e micróglia em Calidris pusilla e Actitis macularia

É objetivo do presente trabalho implantar como modelos para estudo da formação hipocampal das aves migratórias as espécies de maçarico Calidris pusilla e Actitis macularia que abandonam as regiões geladas do Canadá, fugindo do inverno, em direção à costa da América do Sul e do Caribe onde permanecem até a primavera quando então retornam ao hemisfério norte. Mais especificamente pretende-se descrever a organização morfológica qualitativa e quantitativa da formação hipocampal, empregando citoarquitetonia com cresil violeta e imunomarcação para neurônios e células da glia, sucedidas por estimativas estereológicas do número total de células identificadas com marcadores seletivos para aquelas células, assim como comparar a morfologia tridimensional da micróglia das aves com a dos mamíferos. As coletas de campo para a caracterização da formação hipocampal do Calidris pusilla e Actitis macularia em seus aspectos morfológicos foram feitas no Brasil na Ilha Canelas (0°47'21.95"S e 46°43'7.34"W) na Costa da Região Nordeste do Pará no município de Bragança, e no Canadá, na Baia de Fundy perto de Johnson's Mills na cidade de New Brunswick (45°50'19.3" N 64°31'5.39" W). A definição dos limites da formação hipocampal foi feita empregando-se as técnicas de Nissl e de imunomarcação para NeuN. Para a definição dos objetos de interesse das estimativas estereológicas e das reconstruções tridimensionais empregou-se imunomarcação com anticorpo anti-NeuN para neurônios e anti-IBA- 1 para micróglia. As estimativas estereológicas revelaram em média número similar de neurônios nas duas espécies enquanto que no hipocampo de Actitis macularia observou-se número de micróglias 37% maior do que no de Calidris pusilla. Além disso, encontrou-se que em média o volume da formação hipocampal do Actitis macularia é 38% maior do que o encontrado em Calidris pusilla. Os estudos comparativos da morfologia microglial das duas espécies de aves com a dos mamíferos Rattus novergicus e Cebus apella revelaram diferenças morfológicas significantes que indicam que as micróglias das aves mostram em média, menor complexidade (dimensão fractal), tem diâmetros e perímetros de soma menores e possuem ramos mais finos do que aquelas do rato e do macaco.

ABSTRACT: The aim of this report is to describe the hippocampal formation of two migratory birds, Calidris pusilla and Actitis macularia, that leave the cold regions of the Canadian Tundra, escaping the winter, towards the coast of South America and the Caribbean Islands where they remain until winter ends returning to the Northern hemisphere. We intend to describe the qualitative and quantitative morphological organization of the hippocampal formation, using cytoarchitetonics with cresyl violet and immunostaining for neurons and microglia, followed by stereological estimates of the total number of cells identified with selective markers. We intend as well to compare the three-dimensional morphology of hippocampal microglia of these species with those of the dentate gyrus of Wistar rats and Capuchin monkey. The shorebirds used in the characterization were captured in Canela Island, Bragança City, State of Pará, Brazil (0°47'21.95"S and 46°43'7.34"W), as well as in Canada, in the Bay of Fundy, near Johnson's Mills, New Brunswick (45° 50' 19.3" N 64° 31' 5.39" W). The hippocampal formation limits definition was performed employing Nissl staining and immunostaining for NeuN. For the objects of interest definition of stereological estimates and three-dimensional reconstructions we used immunostaining with anti NeuN for neurons and anti-IBA-1 for microglia respectively. The stereological results revealed similar number of neurons in both species whereas the number of microglia in Actitis macularia was 37% higher than in Calidris pusilla. Furthermore, it was found that the hipocampal formation average volume in Actitis macularia was 38% higher than that found in Calidris pusilla. Comparative studies of the microglial morphology with mammals (Rattus novergicus and Cebus apella) revealed significant morphological differences that indicate microglia in birds shows on average lower complexity (smaller fractal dimension), smaller tree volumes and areas and thinner branches than rat and monkey microglia.