Caracterização genética de micobactérias não tuberculosas isoladas de espécimes clínicos pulmonares no estado do Pará

Nos últimos anos tem sido observado um aumento de relatos de infecções causadas por micobactérias não tuberculosas (MNT). No entanto, dados sobre frequência e espécies envolvidas em infecções pulmonares no Brasil são limitados, principalmente em estados da Região Norte do Brasil. O conhecimento das espécies de MNT associadas às infecções pulmonares tem importância clínica e epidemiológica, sendo as técnicas moleculares ferramentas capazes de oferecer um diagnóstico espécie-específico, o qual é necessário para a instituição de terapia adequada. O presente trabalho descreve a diversidade de MNT isoladas de espécimes pulmonares encaminhados ao Instituto Evandro Chagas entre 1999 e 2011 para pesquisa de micobactérias. As MNT foram inicialmente caracterizadas por PCR-restriction analysis (PRA-hsp65) e reidentificadas por sequenciamento dos genes RNAr 16S, hsp65, rpoB e região ITS1. De acordo com os achados, o método de PRA-hsp65 mostrou-se uma ferramenta prática para identificação MNT, permitindo a distinção de uma grande variedade de espécies de forma rápida, simples e barata, em comparação com o sequenciamento. Além disso, como sugerido no presente estudo, de acordo com a diversidade de espécies local, este método pode ser passível de modificações para proporcionar maior poder discriminatório. Para isolados do complexo Mycobacterium avium (MAC), a aplicação da análise de sequência do gene rpoB não se mostrou como alternativa adequada para discriminação de isolados do Estado do Pará, gerando resultados discrepantes com baixa resolução taxonômica. Um espectro particular de MNT foi associado aos casos de infecção pulmonar na região, representado principalmente por espécies dos complexos M. chelonae-M. abscessus (M. abscessus, M. massiliense e M. bolletii), M. avium (M. avium, M. intracellulare e M. colombiense) e M. simiae (M. simiae e taxa não nomeados). Dentre esse último, duas potenciais espécies foram detectadas, M. paraensis sp. nov. e M. amazoniensis sp. nov., sendo propostas como novos membros do complexo M. simiae. Entre os indivíduos afetados, as principais características encontradas foram sexo feminino, a idade superior a 50 anos, etnia parda e história de infecção prévia por tuberculose. Embora este estudo não demonstre a real magnitude de infecções pulmonares por MNT no Estado do Pará, ele descreve a diversidade de espécies e claramente retrata a importância desse grupo na região, chegando a representar 13,5% dos isolamentos micobacterianos em um laboratório de referência. Conjuntamente a esse achado, a identificação de casos de MNT em indivíduos presuntivamente diagnosticados com TB, indica a necessidade de confirmação bacteriológica, especialmente nos casos de resistência primária ao esquema básico da tuberculose.

ABSTRACT: In recent years have been seen increased reports of nontuberculous mycobacteria (NTM) infections in the world. However, data on frequency and NTM species associated with pulmonary infections are still limited in Brazil, especially in states of Northern Brazil. The knowledge of species associated with NTM lung infections has clinical and epidemiological importance, being molecular techniques efficient tools to provide diagnostic species-specific, which is necessary for choice of appropriate therapy. This study describes the diversity of NTM isolated from respiratory specimens at the Evandro Chagas Institute between 1999 and 2011. The NTM were initially characterized by PCR-restriction analysis (PRA-hsp65) and reidentificated by sequencing of 16S rRNA, hsp65, rpoB and ITS1 targets. According to ours findings, the PRA-hsp65 method proved to be a convenient tool for identifying NTM, allowing distinction of a variety of species quickly, simply and inexpensively, as compared to the sequencing. Moreover, as suggested in this study, according to local species diversity, this method can be subject to modifications to provide greater discriminatory power. Sequence analysis of the rpoB gene of Mycobacterium avium complex (MAC) revealed that this target is not a suitable alternative for discrimination of isolates from State of Para, because it generated discrepant results with low taxonomic resolution. M. chelonae, M. avium and M. simiae complexes were the most frequent NTM. Two potential species were detected, M. paraensis sp. nov. and M. amazoniensis sp. nov., being proposed as new members of the M. simiae complex. Among the patients with NTM disease, the main characteristics found were women older than 50 years, pardo ethnic group and previous tuberculosis. Although this study does not show the real magnitude of NTM lung infections in State of Para, it describes the diversity of species and clearly reveals the importance of this group in the region, which has accounted 13.5% of mycobacterial isolates in a reference laboratory. The findings highlight the need for bacteriological confirmation of cases presumptively diagnosed as TB with primary resistance to therapy for TB.