Ocorrência de rotavírus do grupo D em aves criadas em granjas na mesorregião metropolitana de Belém, Pará

Os rotavírus infectam seres humanos e várias espécies de animais e são constituídos por partículas icosaédricas, não envelopadas, formadas por um genoma de 11 segmentos de dsRNA. São classificados em sete grupos designados de A-G. O rotavírus do grupo D (RVs-D) tem sido documentado em aves, porém existem poucos estudos disponíveis, principalmente com dados de detecção por RT-PCR e obtenção de sequências nucleotídicas. Este estudo objetivou investigar a ocorrência de RVs-D em aves criadas em granjas situadas na Mesorregião Metropolitana de Belém- Pará, no período compreendido entre 2008 a 2011. Foram colhidos 85 pools de amostras fecais provenientes de 37 granjas pertencentes a oito municípios da Mesorregião Metropolitana de Belém. O dsRNA viral foi extraído a partir das suspensões fecais e submetido à eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) seguido da RT-PCR realizada a partir da construção de iniciadores específicos para os genes VP6 e VP7 do RVs-D. Foi selecionada uma amostra positiva de cada município para o sequenciamento de nucleotídeos dos genes VP6 e VP7, sendo cinco amostras clonadas. A EGPA demonstrou positividade em 14/85 (16,5%) amostras e a RT-PCR em 30/85 (35,3%) amostras. Dos oito municípios estudados, sete apresentaram amostras positivas para RVs-D. Dentre as 37 granjas pertencentes a esses municípios foi observado a presença dessa infecção viral em 17 (45,9%) das granjas estudadas. O intervalo de idade em que o RVs-D foi detectado com maior frequência foi o de aves entre 16 a 30 dias (23/37 – 62%) do total de amostras nesta faixa etária. As sequências nucleotídicas das sete amostras foram classificadas como pertencentes ao RVs-D com bootstrap de 100 corroborando com esse agrupamento. As sequências do gene VP6 apresentaram 90,8-91,3% de similaridade com o protótipo de RVs-D (05V0049) e 98,5-99,9% de similaridade quando comparadas entre si. Para o gene VP7 apresentaram 87-96,1% de similaridade com o protótipo deste grupo e foram 94,1-100% similares quando comparados entre si. A presente análise assume um caráter pioneiro no Brasil e no mundo, permitindo ampliar os conhecimentos acerca do RVs-D.

ABSTRACT: Rotaviruses infect human beings and various species of animals. They are composed of non-enveloped icosahedral particles formed by a genome of 11 segments of dsRNA. They are classified into seven groups designated from A-G. The rotaviruses of group D (RVs-D) have been documented in birds; however there are few studies available especially the RT-PCR detection data with obtainment of nucleotide sequence. The aim of this study is to investigate the occurrence of RVs-D among the birds raised in farms situated in the metropolitan mesoregion of Belem, Para-Brazil during the period between 2008 and 2011. 85 pools of faecal samples were collected from 37 farms in eight counties of the metropolitan mesoregion of Belem. The viral dsRNA were extracted from faecal suspensions and submitted to polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) followed by RT-PCR conducted using the specific primers for VP6 and VP7 genes of the RVs-D, one positive sample was collected from each county for nucleotide sequencing of VP6 and VP7 genes, with five samples being cloned. The PAGE showed positivity in 14/85 (16.5%) of the samples and the RT-PCR in 30/85(35%) of the samples. Among the eight counties studied, seven presented samples positive for RVs-D and the viral infection was observed in 17(45.9%) of the 37 farms in these counties. The age interval where the RVs-D was detected at higher rate was among birds aged between 16 and 30 days (23/37-62%) of the total at this age. the nucleotide sequences of the seven samples were classified as RVs-D with bootstrap of 100 corroborating with this grouping. the sequences of VP6 gene presented 90. 8-91.3% of similarity with the prototypes of RVs-D (05V0049) and when compared among themselves. The VP7 genes presented 87-96.1% similarity with the prototype of this group (94.1-100% similarity) when compared among themselves. This analysis is a pioneer of its kind in Brazil and in the world, and it seeks to expand the knowledge about RVs-D.