Detecção da Helicobacter pylori através da técnica de reação em cadeia da polimerase em amostras fecais de crianças da cidade de Belém-Pará

A infecção pela Helicobacter pylori é uma das mais comuns em humanos, admite-se que é adquirida na infância e que é uma das principais causas de gastrite e úlcera gástrica na vida adulta. Entre os vários métodos de diagnósticos da infecção pela H. pylori, a reação e cadeia da polimerase (PCR) tem mostrado alta sensibilidade para a detecção desta bactéria em amostras gástricas, orais fecais. Com o objetivo de padronizar a técnica de PCR para detectar a presença da H. pylori nas fezes e comparar com o método de diagnóstico sorológico, utilizou-se uma amostra de 79 crianças provenientes de um estudo soroepidemiológico realizado em Belém-Pará, no ano de 2003. O DNA total foi extraído das fezes através de um protocolo padronizado neste estudo baseado na associação dos métodos de fervura em resina quelante e digestão por proteinase, seguido por fenol-clorofórmio. Para a amplificação do DNA utilizou-se iniciadores para o gene 16S rRNA para o gênero Helicobacter e para detecção específica da H. pylori utilizou-se iniciadores para trecho do gene ureA. O fragmento foi visualizado em gel de agarose 2% corado com brometo de etídio. A presença da H. pylori foi verificada em 69,62% (55/79) dos pacientes. A análise comparativa entre o ensaio sorológico e a PCR ureA, revelou que a técnica molecular apresenta um melhor desempenho no diagnóstico de H. pylori em fezes (p = 0,0246). A aplicação da técnica da PCR em amostras fecais de crianças, por ser um procedimento não invasivo e altamente eficiente pode ser utilizada para detecção da infecção pela H. pylori tanto na rotina laboratorial como em pesquisas de interesse epidemiológico.

ABSTRACT: The infection for the Helicobacter pylori is one of the most common in humans, it is admitted that is acquired in the childhood and that it is one of the main gastritis causes and peptic ulcer in the adult life. Among the several diagnosis methods for the H. pylori infection, the Polimerase Chain Reaction (PCR) has been showing high sensibility for the detection of this pathogen in gastric, oral and faecal samples. With the objective of standardizing the PCR technique to detect the presence of H. pylori of in stool samples and to compare this method with sorologic diagnosis, we studied a samples of 79 children coming of a seroprevalence study realized in the city Belém-Pará in 2003. The genomic DNA was extracted of the feces through a protocol standardized in this research based on the association of quelator agents and proteinase digestion, followed by a phenol-chloroform procedure. For the DNA amplification it was used primers for the gene 16SrRNA specific for Helicobacter genus and for specific detection of the H. pylori it was used primers for desigend for ureA gene. The visualization of the fragments was performed agarose 2% gels stained with ethidium bromide. The presence of the H. pylori was verified in 69,62% (55/79) of the patients. The comparative analysis between the serologic research and the ureA PCR revealed that the molecular technique presents a better acting in the diagnosis of H. pylori in feces (p = 0,0246). The application of the technique of PCR in children's fecal samples, for being a non invasive highly efficient procedure, can be used for detection of the infection by H. pylori in the laboratorial routine as well as in researches of epidemiologic interest.