Avaliação do efeito antigenotóxico e anticitotóxico do bioproduto método CANOVA®

O Método CANOVA® (CA) é um imunomodulador brasileiro de formulação homeopática. CA é indicado em condições clínicas nas quais o sistema imune se encontre comprometido. O N-Metil-N-Nitrosoureia (NMU) é um agente N-nitroso alquilante e carcinogênico utilizado como modelo experimental em roedores e macacos. O NMU também apresenta efeitos genotóxicos/mutagênicos analisáveis por testes clássicos de detecção de danos ao DNA e aberrações cromossômicas. Apesar de vários estudos terem demonstrado resultados promissores na utilização do medicamento CA, não existem trabalhos relatando possíveis efeitos antigenotóxicos deste medicamento, a despeito de seu potencial anticarcinogênico. Assim, o presente trabalho avaliou in vitro os efeitos antigenotóxicos e anticitotóxicos do medicamento CA em linfócitos humanos expostos ao NMU. Foram utilizadas amostras de linfócitos humanos que foram submetidos a diferentes concentrações de uma mistura contendo CA e NMU. A viabilidade das células expostas ao NMU foi avaliada pelo ensaio MTT, a genotoxicidade/antigenotoxicidade do CA foi avaliada pelo teste do cometa e a anticitotoxicidade do CA foi verificada pela quantificação de apoptose e necrose utilizando corantes fluorescentes (laranja de acridina/brometo de etídeo). No teste MTT verificamos que o NMU conseguiu diminuir a viabilidade dos linfócitos de forma significativa. No teste do cometa foi observado que CA diminui significativamente os danos ao DNA induzidos pelo NMU, caracterizando um claro efeito antigenotóxico do composto homeopático. CA também diminuiu de forma significativa a frequência de apoptose induzida pelo NMU em leitura realizada após 24 horas de tratamento. Concluímos que o CA apresentou um efeito antigenotóxico e anticitotóxico nas condições avaliadas no presente estudo, demonstrando, assim, um claro potencial citoprotetor.

ABSTRACT: The CANOVA® (CA) method is a Brazilian homeopathic immunomodulator. CA is indicated in clinical conditions where the immune system is impaired. N-Methyl-Nnitrosourea (NMU) is an N-nitroso carcinogenic alkylating agent used as an experimental model in rodents and monkeys. NMU also shows genotoxic/mutagenic effects that can be assessed by classical tests such as detection of DNA damage and chromosomal aberrations. Although several studies have shown promising results in the use of CA, there are no studies reporting possible antigenotoxic effects of this medicine, despite its anticancer potential. Therefore, the present study evaluated the in vitro antigenotoxic and anticytotoxic effects of CA in human lymphocytes exposed to NMU. Samples of human lymphocytes that were subjected to different concentrations of a mixture containing CA and NMU were used in the present study. The viability of cells exposed to NMU was evaluated by MTT assay, CA genotoxicity/antigenotoxicity was evaluated by the comet assay and CA anticytotoxicity was assessed by quantification of apoptosis and necrosis using fluorescent dyes (acridine orange/ethidium bromide). The MTT assay showed that NMU was able to decrease lymphocyte viability significantly. By using the comet assay it was observed that CA significantly reduces DNA damage induced by NMU, which sets a clear antigenotoxic effect of the homeopathic compound. CA also reduced significantly the frequency of NMU-induced apoptosis after 24 hours of treatment. We conclude that CA had an antigenotoxic and anticytotoxic effect in the conditions evaluated in this study, thereby demonstrating a clear cytoprotective potential.