Screening de polimorfismos e análise comparativa de alterações no número de copias do gene tp53 em gliomas

As neoplasias astrocitárias correspondem a cerca de (60%) dos tumores do sistema nervoso central, sendo que atingem principalmente adultos numa fase altamente produtiva da vida e com evoluções pouco satisfatórias apesar dos tratamentos disponíveis. Um melhor entendimento de sua biologia molecular se faz necessário na tentativa de compreender sua evolução e melhor planejar e tratamento, assim como na busca de novas terapias. Este trabalho teve como objetivo analisar modificações no gene TP53 com relação ao número de cópias e polimorfismos nos éxons de 4 a 11, considerados hotspots para mutações. Um total de 14 amostras de diferentes graus de malignidade foram analisadas por experimentos de FISH interfásico com sondas loco-específicas do gene TP53 e centroméricas para o cromossomo 17, e também pela técnica de SSCP para o screening de polimorfismos dos éxons 4-10. Foram comparados os resultados obtidos entre tumores de graus I e II (benignos) com aqueles de graus III e IV (malignos). Os resultados referentes às sondas loco-específicas (gene TP53 e centrômero do cromossomo 17) mostraram que a ocorrência de deleções ou amplificações, apesar de importantes estatisticamente em relação aos núcleos com número de marcações normais, não apresentou correlação com idade, sexo ou grau de malignação. Entretanto, as alterações foram encontradas com maior freqüência nos paciente portadores de astrocitomas de grau intermediário (III). A técnica de SSCP revelou polimorfismos nos éxons 5, 7 e 10, e apesar de não estarem associados à malignidade tumoral, os casos polimórficos corresponderam aos pacientes com menor sobrevida após tratamentos, sugerindo, uma associação entre mutações nesses éxons e uma maior agressividade tumoral.

ABSTRACT: Astrocytic neoplasms comprises around 60% of the Central Nervous System tumors, affecting mainly adults in a highly productive phase of life, and showing poor prognosis despite of the available treatments. A better knowledge of the molecular biology of this group of tumors is necessary to understand their evolution and to plan the treatment in a better way, as well as to develop new therapies. Hence, this study had the aim the analysis of modifications of gene TP53 related to changes in the number of copies and the presence of polimorphisms in exons 4 to 11, considered hotspots for mutations. A total of 14 samples of different malignant grades were analyzed by interphasic FISH using locus-specific probes for gene TP53 and centromeric for chromosome 17, and by SSCP for screening polymorphism in exons 4 to 11. The results were compared between tumors with grades I and II (benign) to those with grades III and IV (malign). The results concerning the locus specific probes (gene TP53 and centromere of chromosome 17) showed that the occurrence of deletions and amplifications were statistically important when compared to nuclei with normal copy number. However, these alterations were not related to the age, sex or malignancy. On the other hand, these alterations were found more frequently in patients with tumors with intermediate grades (III). SSCP experiments revealed polymorphisms in exons 5, 7 and 10, and although they were not realted to the malignancy of tumors, the samples with polymorphism corresponded to the patients with shorter survival after treatment, suggesting a relation between the mutations in these exons and higher aggressively tumors.