A importância da contraimunoeletroforese na detecção de antígenos nucleares extraíveis SS-A/Ro e SS-B/La para diagnóstico de doença reumática sistêmica

Pós-graduação em Patologia - FMB

O presente trabalho teve como objetivo principal padronizar o teste de contraimunoeletroforese (CIE) para detecção dos autoanticorpos contra os antígenos SS-A/Ro e SS-B/La. Como complementação, realizou-se a padronização da obtenção dos antígenos Ro e La à partir de baço de cão. Para consecução dos objetivos, foram realizadas as seguintes etapas: 1. Extração dos antígenos Ro e La à partir de baço de cão 2. Padronização da CIE com os antígenos obtidos: 2.1 Padronização da técnica CIE propriamente dita; 2.2 Teste qualitativo dos antígenos Ro e La obtidos com padrão USP-SP e ELISA-kit comercial para esses antígenos. 3. Escolha dos casos de doença reumática (diagnosticados por biópsia - 40 pacientes) e controles (soro de doadores de sangue - 10 doadores). As doenças selecionadas tiveram a seguinte distribuição: 3.1 Lúpus Eritematoso Sistêmico = 29 casos 3.2 Lúpus Eritematoso Discóide = 4 casos 3.3 Esclerodermia = 3 casos 3.4 Síndrome de Sjögren = 4 casos 4. Realização dos testes CIE e ELISA-kit. 5. Obtenção dos resultados dos testes de imunofluorescência indireta (IFI) para fator anti-núcleo (FAN) e anti-DNA, ELISA- RNP e ELISA- Sm, realizados na rotina diagnóstica de doenças autoimunes no Laboratório de Imunopatologia do Departamento de Patologia- FMB-UNESP. 6. Comparação e estatística dos resultados obtidos pela CIE com os demais testes. Os resultados e as conclusões obtidas foram as seguintes: 1. Na padronização e nos testes dos soros dos pacientes reumáticos, a CIE apresentou, em geral, apenas uma linha de precipitação bem definida. Somente em dois casos ocorreram duas linhas de precipitação. A presença de uma linha de precipitação impossibilitou a caracterização da presença de anticorpos anti-Ro e anti-La. A detecção de apenas uma linha de precipitação pode ter sido devida: a) aos baixos níveis de...

The main objective of the present work was to standardize the counterimmunoelectrophoresis assay for the detection of autoantibodies to the SS-A/Ro and SS-B/La autoantigens. As a complementary objective, the extraction of both antigens from dog's spleen was also standardized. To accomplish these objectives, the following steps was performed: 1. Extraction of the Ro e La antigens from dog's spleen. 2. CIE standardization with the extracted antigens: 2.1 Standardization of CIE test; 2.2 Qualitative and quantitative analysis of the Ro e La antigens present in the extract of the spleens with a gold-standard (positive serum against Ro and La antigens + Ro and La antigens obtained from spleen dog) obtained from the University of São Paulo-SP and with a commercial ELISA-kit for detection of autoantibodies against these antigens. 3. Selection of the cases with rheumatic disease (diagnosed by biopsys - 40 patients) and normal individual for control serum (blood donors - 10 donors). The diseases and the number of each one in the forty selected cases was distributed as follow: 3.1 Systemic erithematous lupus = 29 cases 3.2 Discoid erithematous lupus = 4 cases 3.3 Scleroderma = 3 cases 3.4 Sjögren syndrome = 4 cases 4. Performance of the CIE e the ELISA-kit tests. 5. Obtaining the results of the following tests: IFI , AAN anti-DNA, ELISA- RNP and ELISA- Sm, registered in the files of the service of autoimmune diseases of the Laboratory of Immunopathology, Department of Pathology - UNESP University - Botucatu Medical School. 6. Statistical analysis and comparison of the results of CIE and other tests. The results and conclusions were the following: 1. In the standardization for the Ro and La antigens in the extract of the spleens and in the tests performed in the serum of rheumatic patients, the CIE in general expressed only one well-defined line of precipitation. Only... (Complete abstract, click electronic access below)