Caracterização molecular de isolados de Paracoccidioides brasiliensis obtidos de Dasypus novemcinctus (tatu) e sua correlação com virulência e origem geográfica

Pós-graduação em Patologia - FMB

O fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis (Pb) é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), a micose sistêmica mais importante da América Latina. A espécie de tatu Dasypus novemcinctus mostrou ser um importante reservatório do fungo e o estudo de isolados destes animais será útil para uma melhor compreensão da ecologia e epidemiologia desta doença. O objetivo deste trabalho foi comparar a virulência e variabilidade genética de isolados de tatus e de pacientes para melhor compreender a importância do tatu na PCM. Os isolados animais foram obtidos da área endêmica de Botucatu, São Paulo, Brasil, com exata informação dos locais de coleta. Os isolados clínicos, exceto a cepa padrão Pb265, foram obtidos de pacientes residentes nos municípios de Pratânia, Manduri e Botucatu. A virulência foi avaliada no modelo experimental do hamster através da contagem de UFC (Unidades Formadoras de Colônias), histopatologia e dosagem de anticorpos específicos e a caracterização molecular por meio da técnica de RAPD e sequenciamento do DNA ribossômico. Todos isolados de tatus foram virulentos, disseminando-se para vários órgãos. A cepa Pb265, isolada de paciente, apresentou baixa virulência. A contagem de UFC nos diferentes órgãos permitiu uma classificação do fungo em 4 categorias: virulência muito alta, virulência alta, virulência intermediária e baixa virulência. A análise molecular mostrou grande diversidade genética entre os isolados, porém não houve separação entre os fungos isolados de pacientes e de tatu. Estes resultados indicam que tanto o homem quanto o tatu podem estar sendo infectados por patógenos com mesmo genótipo, provavelmente localizados em foco ambiental comum. Portanto, os tatus como reservatórios do P. brasiliensis na natureza, representam importantes elos na cadeia da doença...

Paracoccidioides brasiliensis is the etiologic agent of paracoccidioidomycosis (PCM), the most important systemic mycosis in Latin America. The armadillo Dasypus novemcinctus has been confirmed as the first natural reservoir of this fungus and its geographic distribution is similar to the distribution of human PCM. This work analysed the virulence profiles and genetic diversity of P. brasiliensis isolates from different armadillos and clinical isolates. The animal isolates were obtained from the Botucatu endemic area of PCM, with exact information of the collection sites. The clinical isolates, except Pb265, were obtained from patients that live in the same endemic area (Pratânia, Manduri and Botucatu county). Virulence was evaluated in an experimental hamster model by colony-forming units (CFU) and histopathological analysis in the testis, liver, spleen, lung and circulating specific antibodies measured by ELISA. Molecular characterisation was evaluated by RAPD methods and sequencing analyses of the internal transcribed spacer regions (ITS 1 and ITS 2) and 5.8 S ribosomal gene. All isolates from armadillos were virulent, with dissemination to many organs. The clinical isolate Pb 265 was less virulent. The isolates were classified into four categories according to number of CFU per gram of tissue: very high, high, intermediate and low virulence. Molecular analysis showed large genetic similarity between all isolates and did not separate armadillos from clinical isolates. This study confirms that armadillos harbor pathogenic genotypes of P. brasiliensis, probably the same ones that infect man. Thus, the armadillos are very important animals in the epidemiology this disease.