Caracterização morfológica, bioquímica e molecular de rizóbios recomendados para inoculação de leguminosas arbóreas

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Pós-graduação em Microbiologia Agropecuária - FCAV

Este trabalho objetivou avaliar as diferenças microbiológicas, moleculares e a composição de exopolissacarídeos entre as estirpes que foram classificadas como Bradyrhizobium recomendadas para a inoculação de leguminosas arbóreas, mas que através de ensaios isoenzimáticos da superóxido dismutase apresentaram perfis de Rhizobium. As estirpes foram crescidas em meio de cultura RDM e avaliadas em curvas de crescimento, morfologia de colônias, produção de ácido/base. A análise dos açúcares presentes nos EPS foi feita em CLAE (cromatografia líquida de alta eficiência) e a análise molecular foi realizada através da metodologia de PCR-RFLP utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores específicos para a região do DNA correspondente ao 16S rDNA , para as restrições utilizou-se as endonucleases Taq I, Msp I, Hae III e Dde I. Os fragmentos foram visualizados em gel de agarose e analisados pelo programa Quantity One (BIORAD) que utiliza para a comparação dos dados o coeficiente de Dice e para o agrupamento o método UPGAMA(Unweighted pair group method with arithmetic means). De acordo com os resultados obtidos pode-se verificar que as estirpes SEMIA 5080, 6160 e 6159 e SEMIA 4077 e 6070 apresentaram todas as características avaliadas como sendo dos gêneros Bradyrhizobium e Rhizobium, respectivamente, entretanto pode-se observar que existe uma mistura de características entre as outras estirpes. O grupo formado pelas estirpes SEMIA 6159, 6192 e 6164 apresentou predominância das características de Bradyrhizobium, enquanto que aquele formado pelas estirpes SEMIA 6162 e 6168 mostrou-se preponderantemente com características de bactérias do gênero Rhizobium. Por outro lado, o grupo formado pelas estirpes 6169, 6161 e 6165 apresenta uma equivalência entre as características dos gêneros Bradyrhizobium e Rhizobium.

This research aimed to evaluate strains of Bradyrhizobium recommended for inoculation of legume trees according to their microbiological, molecular and, exopolysaccharides contents characteristics. Although these strains were supplied as Bradyrhizobium, their isoenzymatic profile for superoxid dismutase was similar to Rhizobium profile. The strains were grown in RDM culture medium for determination of their growth curve, the colony morphology and the production of acids/bases. The analysis of sugar content of exopolysaccharides was done using HPLC (HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY) and the molecular analysis was done by PCR-RFLP using specific primers for 16S rDNA. The restrictions used the endonucleases Taq I, Msp I, Hae III and Dde, the fragments were observed on EBAGE and analysed by Quantity One Software. This program uses the Dice coeficient for the comparation of the data and the methodology of UPGAMA for the grouping. The results obtained showed strains SEMIA 5080, 6160, 6159 and SEMIA 4077, 6070 presented all characteristics as belonying to the genera Bradyrhizobium and Rhizobium, respectively. Besides either, the results showed that there are a mix of characteristics on the other strains. The group formed by SEMIA 6192 and 6164 presented predominance of characteristics from Bradyrhizobium, by the way the group constituted by SEMIA 6069, 6162 and 6168 showed more characteristics from Rhizobium. Another group, formed by the strains SEMIA 6169, 6161 and 6165 showed similar numbers of charactheristics from Rhizobium and Bradyrhizobium.