Aspectos da patogenia e análise da variabilidade da glicoproteína S do Coronavirus dos Perus isolado no Brasil

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Pós-graduação em Microbiologia - IBILCE

No últimos anos, a avicultura brasileira posicionou o país como o terceiro maior produtor mundial de perus, entretanto o setor permanece em acentuado crescimento e tem uma grande importância econômica, movimentando cerca de 10 milhões de dólares por ano. A indústria avícola brasileira obteve novos mercados, mostrando novas perspectivas no comércio internacional. O Coronavirus dos Perus (Turkey Coronavirus, ¨TCoV) é um vírus envelopado, com RNA de fita simples, não segmentado, com sentido positivo e pertence a ordem Nidovirales, família Coronavirus e gênero Coronavirus (grupo III). Trata-se de um agente causador de enterites altamente transmissíveis, gerando grandes perdas econômicas no Brasil e no mundo. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o processo de apoptose celular e a variabilidade molecular em tecidos de embriões de perus experimentalmente infectados com TCoV (primeiro isolado brasileiro, 2007). A infecção experimental foi desenvolvida por meio da inoculação viral na cavidade amniótica de embriões de perus com 23-25 dias de incubação por nove vezes consecutivas. Foi empregada a técnica de imunoistoquímica no intuito de detectar os marcadores apoptóticos Anexina V, Caspase 2, Caspase 3, p53 e ainda a detecção de apoptose com o emprego do kit TUNEL. Foi realizado o sequenciamento do vírus original e suas passagens em ovos embrionados a fim de detectar mutações decorrentes das passagens virais. O TCoV propagou em ovos embrionados de perus (Melleagridis gallopavo) apresentando vacuolização dos enterócitos e congestão como lesões histopatológicas. A análise das lesões macroscópicas mostrou congestão moderada, acúmulo de líquidos e processo inflamatório. A apoptose foi identificada pelo uso do kit comercial TUNEL e mostrou a presença viral no intestino bem como a ocorrência de apoptose celular nos enterócitos. Os resultados...

The Brazilian poultry industry represents third world producer of turkeys, in last years, whereas the sector is in growth and has a large economic importance moving around 10 million of dollars per year. Brazilian’s industry obtained new markets, showing new perspectives into the international trade. Turkey Coronavirus (TCoV) is an agent that causes high transmissible enteritis, causing great economic lost, in Brazil and worldwide. It is an enveloped virus, with single strand RNA, non segmented, positive sense, belongs to Nidovirales order, Coronaviridae family and Coronavirus group III. The present work evaluated the apoptosis process and the molecular variety in turkey embryo tissues experimentally infected by turkey Coronavirus (first isolated in Brazil, 2007). The experimental infection was performed trough viral inoculation into amniotic cavity in embryonated turkey eggs with 23-25 days of incubation for nine times consecutivelly. Immunohistochemistry was performed to detect the apoptotic factors Annexin V, Caspase 2, Caspase 3, p53 and apoptosis detection by TUNEL kit. The sequencing of original virus and the respective passages developed to detect mutations acquired through passages. TCoV propagated in turkey eggs (Melleagridis gallopavo) presenting enterocytes vacuolization and congestion as histopathologic lesions. Analysis of macroscopic lesions showed mild congestion, liquid accumulation and inflammation process. The apoptosis identification performed applying the commercial kit TUNEL shown the viral presence in intestinal tissue, as well, the cellular apoptosis occurrence. The results demonstrated positive signals to annexin V, caspase 2, caspase 3 and p53, exactly how described in others authors to others Coronavirus. Regarding to the sequences, it was detected the occurrence of three mutations never described before and 19 mutation of common occurrence... (Complete abstract click electronic access below)