A leukocyte cryopreservation technique for cytogenetic studies

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

O presente estudo teve como objetivo desenvolver uma técnica eficiente de estocagem de leucócitos de cervídeos e ovinos para posterior cultivo e obtenção de preparações citogenéticas. Vários meios de cultura, crioprotetores e protocolos de congelação e descongelação foram utilizados. Foram obtidos os melhores resultados utilizando-se meio de cultura McCoy ou VYM, acrescidos de DMSO, soro equino e PVP como crioprotetores. O melhor protocolo de congelação foi submeter as células a 30 minutos em 4°C e 15 minutos em vapor de nitrogênio líquido, e para descongelação, o lançamento do material ainda congelado no meio de cultivo para propagação.

Several culture, cryopreservation, freezing and thawing methods were tested to develop an efficient technique for storing cervid and ovine leukocytes. The best results were obtained with McCoy or Vega y Martinez (VYM) solution with dimethyl sulfoxide (DMSO), horse serum and polyvinylpyrrolidone (PVP) as cryopreservatives. The best protocol for freezing was 4°C for 30 min followed by 15 min in liquid nitrogen vapor. To thaw, the still frozen material was placed onto cultivation medium for propagation.