Amplificação em imunohistoquímica: estudo comparativo de sistemas de polímeros

Desde o início da utilização da imunohistoquímica em anatomia patológica, um dos objetivos tem sido detetar as quantidades mais ínfimas de antigénio, tornando-o visível ao microscópio ótico. Vários sistemas de amplificação têm sido aplicados de forma a concretizar este objetivo, tendo surgido um grupo genérico de métodos simples e que apresentam uma amplificação superior: são os denominados métodos do polímero indireto. Tendo em conta a variedade de métodos disponíveis, o autor propõe-se a comparar a qualidade de quatro sistemas de amplificação, que recorrem ao método do polímero indireto com horseradish peroxidase (HRP). Foram utilizadas lâminas de diferentes tecidos, fixados em formol e incluídos em parafina, nos quais se procedeu à identificação de 15 antigénios distintos. Na amplificação recorreu-se a quatro sistemas de polímero indireto (Dako EnVision+ System – K4006; LabVision UltraVision LP Detection System – TL-004-HD; Leica NovoLink – RE7140-k; Vector ImmPRESS Reagent Kit – MP-7402). A observação microscópica e classificação da imunomarcação obtida foram feitas com base num algoritmo que enquadra intensidade, marcação específica, marcação inespecífica e contraste, num score global que pode tomar valores entre 0 e 25. No tratamento dos dados, para além da estatística descritiva, foi utilizado o teste one-way ANOVA com posthoc de tukey (alfa=0.05). O melhor resultado obtido, em termos de par média/desvio-padrão, dos scores globais foi o do NovoLink (22,4/2,37) e o pior foi o do EnVision+ (17,43/3,86). Verificou-se ainda que existe diferença estatística entre os resultados obtidos pelo sistema NovoLink e os sistemas UltraVision (p=.004), ImmPRESS (p=.000) e EnVision+ (p=.000). Concluiu-se que o sistema que permitiu a obtenção de melhores resultados, neste estudo, foi o Leica NovoLink.

ABSTRACT - Since the beginning of the use of immunohistochemistry in pathology, one of the aims has been to detect the smallest amounts of antigen, making it visible to the optical microscope. Several amplification systems have been applied in order to achieve this goal and a generic group of simple methods with higher amplification came up, known as indirect polymer methods. Given the diversity of available methods, the author proposes to compare the quality of four amplification systems, which use the indirect polymer method with horseradish peroxidase (HRP). Several slides were used with different formalin fixed, paraffin embedded tissues, allowing the identification of 15 different antigens. Four indirect polymer systems were used for amplification (Dako EnVision+ System - K4006; LabVision UltraVision LP Detection System - TL-004-HD; Leica NovoLink - RE7140-k; Vector ImmPRESS Reagent Kit - MP-7402). The microscopic observation and classification was based on an algorithm that fits intensity, specific staining, nonspecific staining and contrast, on an overall score which can take values between 0 and 25. For the statistical analysis it was used mainly the one-way ANOVA with post-hoc Tukey test (alpha = 0.05). The best result in terms of mean/standard deviation of the scores was the NovoLink (22.4/2.37) and the worst was the EnVision+ (17.43/3.86). It was also found that there is statistical difference between the results obtained by the system NovoLink and the systems UltraVision (p=.004), ImmPRESS (p=.000) and EnVision+ (p=.000). It was concluded that the system allowing the best results in this study was the Leica NovoLink.