Produção e purificação da proteína rica em gla (grp) humana recombinante

Dissertação de mest., Biologia Molecular e Microbiana, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Univ. do Algarve, 2011

As proteínas dependentes de vitamina K (VKD) caracterizam-se pela presença de resíduos de ácido -carboxiglutâmico (Gla), que lhes confere actividade biológica e elevada afinidade para a ligação ao cálcio. Recentemente foi descoberta uma proteína VKD com a maior percentagem de resíduos Gla conhecida, designada por Proteína Rica em Gla (GRP), para a qual é sugerida uma função na modelação fisiológica do cálcio e na calcificação patológica em tecidos moles. Existem vários sistemas para a produção de proteínas recombinantes, que podem ser divididos em dois grandes grupos os sistemas de expressão de procariotas e eucariotas. As principais vantagens dos sistemas de expressão procariotas são a boa caraterização genética, a rapidez de crescimento dos hospedeiros e os baixos custos. Contudo, estes sistemas apresentam como desvantagem, a incapacidade destas células em realizar modificações pós-tradução nas proteínas, que pode implicar a produção de proteínas não funcionais e com alterações estruturais. Os sistemas de expressão eucariotas representam uma alternativa a estes sistemas, embora sejam mais dispendiosos e complexos, possuem a capacidade de realização de modificações pós-tradução o que permite a expressão de proteínas mais complexas na sua forma funcional e ativa. O objetivo inicial deste trabalho consistia na produção, purificação e caraterização bioquímica da GRP humana recombinante (GRP_MP) e de um péptido homólogo à região C-Terminal da GRP humana (GRP_Term). Para a produção da proteína recombinante, foi utilizado um sistema de expressão procariota, através da transformação de Escherichia coli BL21 Star (DE3). A GRP humana recombinante foi produzida com sucesso, obtendo-se cerca de 618 μg de proteína purificada a partir de 50 ml de cultura bacteriana. A obtenção de GRP humana recombinante purificada será uma mais-valia para posteriores estudos de caracterização bioquímica, funcional e estrutural, podendo ter relevância para estudos comparativos da função da GRP -carboxilada e da GRP não - carboxilada.