合胞素在白血病和淋巴瘤细胞中的表达及意义研究

人类内源性病毒(HERVs)是远古具有感染能力的逆转录病毒整合于人类基因组的遗迹, 大约占人类基因组的3%~8%，至少包括31个家族。它们通过不同的途径参与人类各种生理和病理活动的调节过程。大多数人类内源性病毒的基因, 由于基因的突变或部分缺失而失去了转录的能力。但有些基因依然保持完整的开放读码框, 能翻译成有功能的蛋白, 如HERV-W家族的囊膜蛋白合胞素基因, 可以被转录并翻译成有功能的蛋白质。目前合胞素的生理功能以及在各种病理过程中的作用机制仍然不清楚。国内对于合胞素的功能研究处于起步阶段，尚无商品化试剂，而且也没有合胞素抗体制备的报道。我们通过PCR扩增人合胞素基因编码区的DNA片段，将其克隆入原核表达质粒pET30a (+)，转化大肠杆菌 BL21，诱导产生了合胞素-His融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化目的蛋白, 免疫新西兰白兔, 制备了多克隆抗体。最后通过ELISA、Western-Blot和免疫组织化学等方法检测抗体的效价和特异性。我们成功表达并纯化了合胞素-His融合蛋白, SDS-PAGE分析表明融合蛋白主要以包涵体形式存在；ELISA法测定抗体效价为 1:10 000；Western-Blot和免疫组织化学结果显示所制备的抗体能特异性识别合胞素蛋白，为下一步研究合胞素的生物学功能奠定了基础。我们首次发现，合胞素能够在白血病和淋巴瘤细胞系中表达。利用我们制备的抗合胞素多克隆抗体，我们进一步检测该基因是否在白血病和淋巴瘤患者的外周血中表达，所有患者的外周血标本，均来自云南省有关医院。作为对照，我们还检测了20 名健康志愿者的外周血细胞。实验证明，合胞素基因(包括 mRNA 和蛋白)也在白血病患者的外周血细胞表达，而不表达于健康志愿者的血细胞。在30 名不同的白血病和淋巴瘤患者中，有22 名有合胞素的表达。荧光实时定量RT-PCR 的方法比较了合胞素在细胞系和白血病患者外周血中表达的相对定量，发现合胞素基因在所检测的5 种淋巴细胞系、3 种粒细胞系和1 种淋巴瘤细胞系中都有相对稳定的表达，表达水平与C8166 细胞系相比，介于0.5-2 倍之间。而在白血病患者中的表达则介于1.8-33.4 倍不等。我们的结果提示，合胞素可能与白血病的形成有关，因为该基因表达的囊膜蛋白具有很强的促细胞融合活性，含有具有免疫抑制活性的肽段，而且已发现某些与其类似的蛋白有致瘤能力。