人源抗体酶GPX的可溶性表达及生物活性研究

谷胱甘肽过氧化物酶 (Glutathione Peroxidase, GPX)，是生物体内抗氧化应激酶系的重要成员，它可以清除脂质氢过氧化物（ROOH）及过氧化氢 (H_2O_2)，保护机体免受活性氧的损伤或减少活性氧对机体的损伤程度。为了解决鼠源抗体酶GPX应用于人体时会诱发人抗鼠反应 (Human Anti-Mouse Antibody)这一问题，我们实验室从人单链抗体库中筛选了特异的抗体，经化学修饰后得到了具有GPX活性的抗体酶。本文在此工作的基础上，对己筛选出的人单链抗体基因进行了可溶性表达，并用化学修饰的方法进行硒化，得到了GPX活力为80U/μmol的抗体酶。根据优化的表达条件，直接得到了具有天然结构的抗体蛋白，省去了原来的包含体表达中的变性、复性步骤。且所得的抗体为融合蛋白，在蛋白的末端接有6个连续的组氨酸，因此用Ni-NTA亲和层析柱对其进行了一步纯化，即得到了纯抗体蛋白。从而大大的简化了抗体酶的制备过程。本论文还对抗体酶的生物活性进行了研究。采用H_2O_2/Fe~(2+) 自由基发生系统，分别以线粒体的膨胀度、乙二醛生成量和自由基含量为不同的损伤指标进行测量，研究了抗体酶对自由基损伤的牛心线粒体的保护作用。实验结果表明，硒化后的抗体酶具有较强的保护作用。