Lentivirus介导分泌神经营养因子-3的基因工程神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究

神经干细胞(NSC)是中枢神经系统中具有自我更新能力和多种分化潜能的细胞,是脊髓损伤(SCI)后再生修复的理想材料和基因载体。我们探讨了Lentivirus介导分泌神经营养因子-3(NT-3)的基因工程NSC移植治疗SCI的可行性,以期为SCI后功能恢复的实验研究以及进一步临床研究提供基础资料。材料与方法一、实验材料1.试剂与来源:DMEM/F12、B27、N2(Gibco公司),bFGF(Sigma公司),Nestin抗体、NF-200抗体、GFAP抗体(武汉博士德公司),羊抗鼠NT-3抗体(USB公司),超信号West Pico化学发光底物试剂盒(Pierce34079ZZ)、人胚肾293T细胞购自武汉大学保藏中心,携带NT-3和绿色荧光蛋白(GFP)的Lentivirus的各种质粒由美国迈阿密大学Oudega M教授提供。2.实验动物:Wistar大鼠由成都军区昆明总医院实验动物中心提供。二、实验方法1.NSC的分离培养:取孕14d的Wistar胎鼠皮层组织,分离筋膜和血管,反复剪碎,再用200目细胞筛过滤,转入DMEM/F12,加B27添加剂、bFGF(20ng/ml);6~7d传代。

云南省自然科学基金资助项目(2002C0070M)