<i>Enterococcus faecium</i>: caracterização molecular de amostras isoladas no período anterior e posterior a emergência da resistência à vancomicina no Estado do Rio de Janeiro

Nas últimas décadas, <i>Enterococcus</i> resistentes à vancomicina tem se destacado no cenário hospitalar em todo mundo. A emergência da resistência à vancomicina no Estado do Rio de Janeiro foi registrada em 2000, na espécie <i>Enterococcus faecalis</i>. Em seguida, <i>Enterococcus faecium</i> passou a ser prevalente. O objetivo deste estudo foi avaliar a diversidade genética das amostras de E. faecium sensíveis (VSEfm) e resistentes (VREfm) à vancomicina, isoladas em diferentes instituições de saúde do Estado do Rio de Janeiro no período de 1993 a 2008. As amostras bacterianas foram avaliadas por metodologia de eletroforese em campo pulsado (PFGE), após restrição com <i>Sma</i>l, análise do polimorfismo numérico de segmentos repetitivos (MLVA) e tipagem por sequenciamento de múltiplos loci (MLST); além da detecção de marcadores fenotípicos, como a resistência à ampicilina e à ciprofloxacina, e genotípicos, como determinantes genéticos de virulência, que estão vinculados a um complexo clonal globalmente disperso (CC17). A diversidade de Tn<i>1546</i> (que alberga o conjunto gênico <i>vanA</i>) foi determinada por amplificação e restrição com <i>Cla</i>I. Um grupo clonal prevalente foi observado pela metodologia de PFGE e agrupou amostras isoladas, principalmente, no período de 2004 a 2006, estando disseminado por diversas instituições de saúde do Estado, indicando transmissão inter- e intra-hospitalar. A avaliação por MLVA identificou dois MTs prevalentes dentre as amostras VREfm: MT12 relacionado à maioria das amostras dos principais grupos clonais identificados por PFGE e, o MT159 que apresentou frequência aumentada no ano de 2008. A análise por MLST destacou o ST78 associado aos principais grupos clonais definidos por PFGE, bem como, ao MT12. Também foi observada correlação entre o ST412 associado ao grupo clonal formado por apenas amostras de 2008 e o MT159. Foi notório por MLST que as amostras VREfm do Estado do Rio de Janeiro, no período do estudo, estiveram relacionadas CC17, juntamente com algumas amostras VSEfm. Entretanto, os principais marcadores de resistência e de virulência, característicos de CC17, estiveram mais relacionados as amostras VREfm do que as VSEfm, como resistência à ampicilina e à ciprofloxacina; e a presença do gene <i>esp</i> e do alelo <i>purK</i>1. A identificação de VSEfm pertencentes ao CC17 sugerem que amostras já adaptadas ao ambiente hospitalar, podem ter adquirdo o determinante de resistência <i>vanA</i>, facilitando a emergência de amostras de VREfm. Adicionalmente, nossos dados sugerem uma modificação no cenário de amostras VREfm no Rio de Janeiro. Pois a dominância de um grupo clonal prevalente (PFGE- X; MT12; ST78) pode estar sendo substituída pela possível emergência de um novo grupo clonal, que foi característico de amostras mais recentes (PFGE-XV; MT159; ST412), apontando assim, para um novo curso na epidemiologia dos <i>E. faecium</i> no Estado. Um perfil de restrição prevalente de Tn<i>1546</i> idêntico ao protótipo foi observado, apontando que a disseminação da resistência à vancomicina ocorreu por também por transferência horizontal. Entretanto, alterações do tipo deleção e presença de elementos de inserção com aproximadamente 2 kb foram observadas em um número reduzido das amostras. A incongruência no genótipo <i>vanA</i>, em relação ao fenótipo, foi observado para uma amostra. Considera-se fundamental o acompanhamento da disseminação de VREfm, particularmente diante da elevada frequência de amostras pertencentes a um complexo clonal que conjuga multirresistência com virulência, com elevado potencial de adaptabilidade e disseminação.

In the last decades, vancomycin-resistant <i>Enterococcus</I> has emerged in the hospital setting worldwide. The emergence of vancomycin resistance in the State of Rio de Janeiro in 2000 was recorded in the species <i>Enterococcus faecalis</i>. Then, <i>Enterococcus faecium</i> has become prevalent. The aim of this study was to evaluate the genetic diversity of strains of <i>E. faecium</i> susceptible (VSEfm) and resistant (VREfm) to vancomycin, isolated in different hospitals located in Rio de Janeiro State, during the period from 1993 to 2008. The bacterial isolates were analyzed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), after restriction with <i>Sma</i>I, multiple loci VNTR analysis (MLVA), and multilocus sequencing typing (MLST), besides the detection of phenotypic markers, such as resistance to ampicillin and ciprofloxacin, and by the genetic determinants of virulence that are linked to a globally dispersed clonal complex (CC17). The diversity of Tn<i>1546</i> (which harbours the <i>vanA</i> gene) was determined by amplification and restriction with <i>Cla</i>I. A prevalent clonal group was observed by PFGE related to isolates obtained mainly during the period 2004 to 2006, being spread by various health institutions of the state, indicating transmission inter-and intra-hospital. The assessment by MLVA identified two MTs prevalent among the VREfm isolates: MT12 that included most of the strains and was related to the major clonal group identified by PFGE; and the MT159 which showed an increased frequency in 2008. The analysis pointed out the MLST ST78 associated with the major clonal groups defined by PFGE, as well as the MT12. Typing correlation was also identified between ST412 clonal group and MT159. MLST showed that VREfm isolates obtained from the institutions in State of Rio de Janeiro, were related to CC17, including few representants of VSEfm. However, VREfm showed the main resistance markers and virulence characteristics of CC17, comparing with VSEfm, such as ampicillin and ciprofloxacin resistance, and the presence of the allele <i>purK</i>1 and <i>esp</i>. The identification of CC17 among VSEfm isolates to suggested that the presence of this adapted clones may facilitate the emergence of <i>vanA</i> determinant. Additionally, our data pointed to changes in the scenario of VREfm in Rio de Janeiro. The dominance of the prevalent clonal group (PFGE-X, MT12, ST78) may be replaced by the possible emergence of a new clonal group, which was characteristic of most recent samples (PFGE-XV, MT159, ST412). A prevalent restriction profile identical to the prototype Tn<i>1546</i> was observed, indicating that the spread of vancomycin resistance occurred also by horizontal transfer.