Análise comparativa do reconhecimento celular de antígenos dos subgêneros de Leishmania na leishmaniose tegumentar americana

Células Mononucleares do sangue periférico (CMSP) oriundas de 28 pacientes que residem em áreas endêmicas para Leishmania braziliensis foram estudados. Destes, 10 encontravam-se na fase ativa da doença e 18 curados clinicamente para as lesões de leishmaniose. As células foram cultivadas frente à antígenos de 6 espécies de Leishmania: Leishmania: L. (V.) braziliensis (LbAg), L. (V.) guyanensis (LgAg), L. (V.) lainsoni (LlAg), L. (V.) naiffi (LnAg), L. (L.) amazonensis (LaAg), L. (L.) chagasi (LcAg) e antígeno de concanavalina A como mitógeno. Os resultados foram expressos em índices de estimulação (IE). Temendo uma possível degradação protéica, os antígenos foram preparados com PBS e com PBS tampão antiproteolítico e o perfil eletroforético foi analisado através de SDS-PAGE. Os sobrenadantes das culturas foram estocados para os ensaios de ELISA para detecção de IFN-γ. A análise do perfil eletroforético dos antígenos de diferentes espécies de Leishmania demonstrou um padrão distinto e heterogêneo e aparentemente, não foi observada degradação assim que os antígenos foram preparados e 10 meses de estoque. Entretanto bandas parecem ser compartilhadas entre as espécies, que podem estar associadas a uma conservação de antígenos entre as espécies de Leishmania. A resposta proliferativa dos linfócitos (RPL) dos pacientes da forma ativa foi mais intensa para LbAg (1710,3), seguido de LnAg (177,6), LaAg (16,89,8) e LlAg (1410,1), e menos intenso para LgAg (11,46,6). Quando os IE obtidos para LbAg foram comparadas com outras espécies observou-se diferenças para LgAg (p<0.004) e LlAg (p<0.03). Não foram encontrados diferenças no perfil protéico dos extratos antigênicos produzidos com e sem inibidores de protease. Os estímulos obtidos de CMSP de indivíduos curados clinicamente não demonstraram diferenças quando comparados com aqueles da fase ativa da doença. O índice de estimulação (médiadesvio padrão) frente estímulos antigênicos pouco variou entre as espécies: LbAg - 22,222,2, LnAg - 15,911,5, LgAg - 20,720,6, LlAg - 14,710,1, LaAg - 15,1114,5 e L. chagasi - 13,78). A produção de IFN-γ quantificada nos sobrenadantes das culturas frente aos antígenos totais e solúvel mostrou níveis da citocina mais elevados quando utilizou-se antígenos total de L. guyanensis (568,1544,5; mediana: 518,5 pg/mL) quando comparadas às outras espécies analisadas. Porém quando analisadas o antígeno solúvel, podemos observar que tanto para os antígenos da espécie L. braziliensis quanto para L. naiffi, a fração total obteve os maiores índices de estímulos quando comparadas com a fração solúvel. Estes estudos sugerem que há uma reatividade cruzada entre as espécies dos subgêneros Viannia e Leishmania.

Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from twenty-eight (28) from endemic areas by specie L. Braziliensis were studied. Ten (10) patients with active fase and eighten (18) clinic cured were studied. The cells were cultured with six antigens from Leishmania species: Leishmania: L. (V.) braziliensis (LbAg), L. (V.) guyanensis (LgAg), L. (V.) lainsoni (LlAg), L. (V.) naiffi (LnAg), L. (L.) amazonensis (LaAg), L. (L.) chagasi (LcAg) and concanavalina A antigen as mitogen. The results were expresed on stimulation index (SI). Waiting for the possibility of a ou Working with a possible protein degradation, the antigens were prepared with PBS and antiproteolitic PBS and profile electrophoretic were analised through SDS-PAGE. The supernatants that cultures were stored for cytokine detection (IFN-γ). The profile electrophoretic analysis by antigens from diferents Leishmania species showed a different pattern and an heterogeneous and, in addition, it was not observed protein degradation when prepared after the10 months. However, similar bands to be shared between the species, can be the antigens conservation among Leishmania species. The Sis of Lynphocyte proliferation response (LPR) LPR from active forms was significantly higher from LbAg (1710,3), as well as LnAg (177,6), LaAg (16,89,8) and LlAg (1410,1) species and lower from Lg (11,46,6) antigens. The SI from Lb antigens was compared with other species, showed other possibilities from LgAg (p<0.004) and LlAg (p<0.03). Antigens with inhibitor or without inhibitor induced similar SI and not showed regardless of the proteic profile.The SIs of LPR from clinic cured clinic do not seemed differences when it was compared with SIs from patients with active fase. The SI (medianstandard desviation) was significantly higher in cultures stimulated with LbAg - 22,222,2, as well as LnAg - 15,911,5, LgAg - 20,720,6, LlAg - 14,710,1, LaAg - 15,1114,5 e L. chagasi - 13,78). The IFN-γ level from supernatants with total antigen was higher from L. guyanensis (568,1544,5; median: 518,5 pg/mL) specie when compared with other species. In the other hand, the soluble antigen showed to be lower than total antigens to both species (L. braziliensis and L. naiffi). These data suggest there are the cross reativity between species from subgeneras Leishmania.