Capacidade de invasão, persistência intracelular e atividade citotóxica de cepas de <i>Aeromonas</i> spp. em modelo celular <i>in vitro</i> e <i>ex vivo</i>

As <i>Aeromonas</i> são consideradas patógenos em potenciais para o homem e animais e estão amplamente distribuídas no ambiente sendo a água e os alimentos importantes veículos de transmissão. Muitos estudos têm demonstrado que a patologia causada pela infecção por <i>Aeromonas</i> é complexa e envolvem inúmeros fatores de virulência, dentre eles a aderência, invasão, enterotoxinas, hemolisinas, exoenzimas, sideróforos, flagelos, formação de biofilme e mecanismos de secreção. No presente estudo, analisamos os mecanismos de patogênese mediados por <i>A. caviae</i> e <i>A. hydrophila</i>, avaliando a participação desses microrganismos nos processos de adesão, invasão, persistência intracelular e citotoxidade celular. Foram utilizados ensaios quantitativos <i>in vitro</i> para testar associação, invasão e persistência intracelular em linhagens celulares HEp-2 e/ou T84. A interação de tecidos intestinais de coelho cultivados <i>in vitro</i> (IVOC) com três cepas de <i>A. caviae</i> originárias de fezes diarréicas também foi avaliada. Observamos que 10 (62,5%) das 16 cepas de <i>Aeromonas</i> spp. de diferentes origens, submetidas aos testes de invasão quantitativos foram capazes de invadir células HEp-2 e T84 em 6 horas de incubação. As cepas positivas nos testes de invasão foram submetidas ao teste quantitativo de persistência em células HEp-2 e sobreviveram no ambiente intracelular por 48 e/ou 72 horas sem multiplicação. A interação de três cepas de <i>A. caviae</i> com a mucosa intestinal de coelho <i>ex vivo</i> resultou em aderência, produção de muco e alterações como, intensa vacuolização e drástica desorganização estrutural que levaram a destruição das microvilosidades intestinais. Este estudo demonstrou que subconjuntos de cepas de <i>A. caviae</i> e <i>A. hydrophila</i> de diversas origens, foram capazes de invadir, persistir ou destruir linhagens celulares <i>in vitro</i>. Nosso estudo também evidenciou que cepas de <i>A. caviae</i> causaram expressivas alterações morfológicas que resultaram na destruição de epitélios intestinais de coelho <i>ex vivo</i>. Finalmente, nossos resultados contribuíram para reforçar o potencial patogênico de cepas de <i>Aeromonas</i>, em especial, as de origem vegetal e clínica.

The <i>Aeromonas</i> are considered as potential pathogens for humans and animals and are widely distributed in the environment being the major water and food vehicles of transmission. Many studies have shown that the pathology caused by Aeromonas is complex and involve several virulence factors, including adherence, enterotoxins, hemolysins, exoenzymes, siderophores, flagella, biofilm formation and mechanism of secretion. In this study, we analyzed mechanisms of pathogenesis mediated by <i>A. caviae</i> and <i>A. hydrophila</i>, assessing the contribution of these microorganisms in the process of adherence, invasion, intracellular persistence and cellular cytotoxicity. We used in vitro quantitative assays to test association, invasion and intracellular persistence in HEp-2 and / or T84 cell lines. The interaction of intestinal tissues rabbit cultured <i>in vitro</i> (IVOC) with three strains of <i>A. caviae</i> from diarrheic fecal samples was also evaluated. We observed that 10 (62.5%) of 16 strains of <i>Aeromonas</i> spp. of different sources when tested in quantitative invasion assays were able to invade HEp-2 and T84 in 6 hours of incubation. Ten strains of <i>Aeromonas</i> spp. subjected to quantitative test of persistence in HEp-2 cells, survived in the intracellular environment for up to 48 and / or 72 hours without multiplication. The interaction of three strains of <i>A. caviae</i> with rabbit intestinal mucosa <i>ex vivo</i> resulted in adherence, mucus production and alterations, such as, intense vacuolization and severe structural disorganization resulting intestinal villi destruction. This study demonstrated that subsets of <i>A. caviae</i>, <i>A. hydrophila</i> from different sources, were able to invade, persist, or destroy cell lines <i>in vitro</i>. Our study also showed that strains of <i>A. caviae</i> caused significant morphological alterations that resulted in the destruction of intestinal epithelium <i>ex vivo</i> rabbit. Finally, our results support the pathogenic potential of <i>Aeromonas</i>, especially those of vegatable and clinical sources.