Epidemiologia molecular de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) isolados de pacientes com Fibrose Cística

Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) é um importante patógeno pulmonar em pacientes com fibrose cística (FC). Caracteriza-se pela resistência a todos os β-lactâmicos, devido a presença do elemento genético móvel SCCmec o qual abriga o gene mecA. Além disso, é reconhecido por vários fatores de virulência o qual destacamos a toxina Panton-Valentine Leukocidin (PVL), uma citolisina formadora de poros na célula hospedeira, e por apresentar diversos clones epidêmicos envolvidos em surtos hospitalares. O objetivo desse estudo foi caracterizar a epidemiologia de MRSA, isolados de pacientes com FC referente a dois centros de referência no Rio de Janeiro a partir da aplicação de técnicas fenotípicas e genotípicas. Um total de 57 amostras de MRSA foi submetido ao teste de difusão em ágar para 11 antimicrobianos a fim de avaliar perfil de resistência, com aplicação da técnica da PCR foi tipificado o SCCmec e investigado a presença do gene LukS-PV responsável pela codificação da toxina PVL com intuito de estabelecer uma melhor caracterização epidemiológica dos clones identificados pela técnica do MLST (Multilocus Sequence Typing). Os antimicrobianos não β-lactâmicos apresentaram um percentual de resistência abaixo de 50%, em que destacamos a eritromicina com o maior percentual 45,6% e quanto ao perfil de resistência 24,6% foram multirresistentes. Com exceção do SCCmec II, os outros tipos foram encontrados (I, III, IV e V) com os respectivos percentuais de 22,8% (n=13), 7,1% (n=4), 61,4% (n=35) e 3,5% (n=2) e apenas 5,3% (n=3) das amostras não foram caracterizadas, não há dados da prevalência do SCCmec IV. Vinte (35,1%) amostras apresentaram produtos de amplificação compatível com a presença do gene lukS, aproximadamente metade dessas amostras (55%) estava correlacionada ao SCCmec IV. Com a análise do MLST, obtivemos os STs 1 (n=1, 1,7%), 5 (n=28, 49,1%), 30 (n=11, 19,3%), 72 (n=1, 1,7%), 398 (n=1, 1,7%), 1635 (n=7, 12,3%), 1661 (n=2, 3,5%), 239 (n=5, 8,8%), e ainda identificamos um novo ST (2732) presente em 1 amostra. A partir de uma análise associativa entre o MLST e o SCCmec foi possível observar a presença de linhagens características de clones epidêmicos, como o UK-EMRSA-3 (ST5, SCCmec I), USA 800/pediátrico (ST5, SCCmec IV), Oceania Southwest Pacific Clone - OSPC (ST30, SCCmec IV) e Brazilian Epidemic Clone - BEC (ST239, SCCmec III). Em conclusão este estudo é o primeiro a caracterizar linhagens epidêmicas de MRSA nos centros de atendimento a pacientes com FC no Rio de Janeiro, sendo necessário um monitoramento constante a fim de evitar a disseminação desses clones.

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is a major pulmonary pathogen in patients with cystic fibrosis (CF). It is characterized by resistance to all β-lactam antibiotics due to the presence of the mobile genetic element SCCmec which harbors the mecA gen. Furthermore, MRSA is recognized by several virulence factors, such as the toxin Panton-Valentine Leukocidin (PVL), pore-forming cytolysin in the host cell, and produces various epidemic clones involved in hospital outbreaks. The aim of this study was to characterize the epidemiology of MRSA, using phenotypic and genotypic methods of isolates from CF patients from two reference centers in Rio de Janeiro. A total of 57 MRSA isolates were tested by the Agar diffusion test for 11 antibiotics. SCCmec and the presence of the Luks-PV gene, responsible for encoding the PVL toxin, were evoluted by PCR, in order to establish a better epidemiological clone characterization by MLST (Multilocus Sequence Typing) technique. Non-β-lactam antimicrobials showed less than 50% of resistance, which included erythromycin with the highest percentage was 45.6%, beside, multirresistant profile was observed in 24.6% of isolates. We found SCCmec types I, III, IV and V with the corresponding percentage of 22.8% (n = 13), 7.1% (n = 4), 61.4% (n = 35) and 3.5% (n = 2) respectively and just 5.3% (n = 3) isolates were not typified. SCCmec II was not detected among our isolates. Twenty (35.1%) isolates showed amplification products consistent with the presence of the lukS gen, approximately half of these samples (55%) were correlated with SCCmec IV. Using MLST analysis, we obtained STs 1 (n = 1, 1.7%), 5 (n = 28, 49.1%), 30 (n = 11, 19.3%), 72 (n = 1, 1.7%), 398 (n = 1, 1.7%), 1635 (n = 7, 12.3%), 1661 (n = 2, 3.5%), 239 (n = 5, 8, 8%), and further identified a new ST (2732) present in one isolate. Associating MLST and SCCmec, it was possible to observe the presence of epidemic clones, such as, UK-EMRSA-3 (ST5, SCCmec I), USA800/pediatric (ST5, SCCmec IV), Oceania Southwest Pacific Clone - OSPC (ST30, SCCmec IV) and Brazilian Epidemic Clone - BEC (ST239, SCCmec III). In conclusion this study is the first one to characterize epidemic strains of MRSA in care centers of CF patients in Rio de Janeiro, that require constant monitoring in order to prevent the spread of these clones.