Conservação in vitro de germoplasma de Petiveria alliacea L. utilizando cultura de tecidos e criopreservação

A implementação de estratégias visando à conservação de espécies medicinais apresenta grande importância, tanto do ponto de vista ecológico quanto econômico. Petiveria alliacea L., espécie da família Phytolacaceae, conhecida como guiné, erva-de alho, erva-tipi ou amansa-senhor, pode ser encontrada desde a América Central até a América do Sul. Esta espécie possui ampla utilização medicinal, devido à presença, em sua composição, de vários polissulfetos, como o DTS (dibenziltrissulfeto), com propriedades antifúngica, antineoplásica e imunomodulatória, entre outras. O objetivo deste trabalho foi a conservação in vitro de germoplasma de Petiveria alliacea obtido de diferentes populações ocorrentes no Rio de Janeiro, através de métodos baseados em cultura de tecidos e criopreservação. Plantas obtidas através da germinação in vitro foram utilizadas como matrizes para a micropropagação através da multiplicação de meristemas pré-existentes em meio MS sem reguladores de crescimento, e embriões somáticos foram obtidos de forma direta a partir da cultura de explantes foliares das linhagens estudadas (Magé MG; Marechal Hermes MH; Niterói NT; Vila Isabel VI e Planta envasada AL), em presença de PIC (20μM) e 2,4D (22,6 μM), após 60 dias de cultivo. Os ápices caulinares das plantas micropropagadas e os embriões somáticos obtidos foram submetidos à criopreservação através de técnicas de vitrificação, encapsulamento-vitrificação e encapsulamento-desidratação, com a avaliação da pré-cultura e de soluções crioprotetoras (PVS2 e PVS3), em diferentes concentrações e tempos de exposição. Os resultados mostraram uma taxa de 100% de germinação in vitro. As condições para a pré-cultura de ápices foram padronizadas, entretanto não foram obtidos resultados positivos após o descongelamento. Por outro lado, os embriões da linhagem AL (linhagem embriogênica em cultura há 24 meses) mantiveram sua capacidade multiplicativa (100%) (embriogênese secundária) quando submetidos à desidratação em sacarose (0,5M) e expostos às soluções de vitrificação PVS2 e PVS3 pelos menores tempos (15 e 30 minutos). Os diferentes meios de recuperação apresentaram respostas variáveis em relação à capacidade multiplicativa dos embriões. O encapsulamento/vitrificação foi a técnica que promoveu maior tolerância dos embriões ao congelamento. A recuperação dos embriões através de multiplicação após a criopreservação abre uma perspectiva de conservação de genótipos com alta produção de polissulfetos, de interesse para a indústria farmacêutica

The implementation of conservation strategies for medicinal species has great importance, both ecologically and economically. Petiveria alliacea L., family Phytolacaceae, known as guinea, garlic-herb, herb-tipi or amansa-senhor, can be found from Central America to South America. This species has wide medicinal use, due to the presence of several chemicals in its composition, as polysulfides, with antifungal, anticancer and immunomodulatory properties, among others. The objective of this work was the in vitro conservation of Petiveria alliacea germplasm obtained from different populations occurring in Rio de Janeiro, through methods based on tissue culture and cryopreservation. The plants derived from in vitro germination were used as donors for micropropagation through multiplication of pre-existing meristems on MS medium without growth regulators, and somatic embryos were obtained directly from the leaf explants from the studied strains, in the presence of PIC (20μM), after 60 days of culture. Shoot tips from micropropagated plants and somatic embryos were subjected to cryopreservation using vitrification, encapsulation-vitrification and encapsulation-dehydration techniques, with the evaluation of pre-culture and cryoprotectant solutions (PVS2 and PVS3) at different concentrations and exposure times. The results showed a frequency of 100% of propagation of plants derived from in vitro germination. The conditions for shoot tips pre-culture were optimized, although no positive results were obtained after thawing. On the other hand, embryos from AL line, maintained their multiplication capacity (100%) when submitted to dehydration in 0.5M sucrose and exposed to the vitrification solutions PVS2 and PVS3 for short periods (15 and 30 minutes). The different recovery media showed variable responses regarding the multiplication capacity of the embryos. The encapsulation / vitrification technique provided the embryos the higher freezing tolerance. Embryo recovery by multiplication after cryopreservation, opens a conservation perspective for genotypes with high polysulfide production, interesting for the pharmaceutical industry