Análise do efeito do etanol sobre a expressão de proteínas de diferenciação do epitélio escamoso no esôfago de camundongos BALB/c

Câncer de esôfago (CE) é um dos tipos de câncer mais frequentes e agressivos, estando entre os dez tipos de câncer mais incidentes e letais no mundo. Entre as regiões mais incidentes do CE estão os países em desenvolvimento, como o Brasil. Apesar de recentes avanços em terapias anticâncer, menos de 10% dos pacientes acometidos por esta doença possuem uma sobrevida maior que cinco anos após seu diagnóstico e este fato é consequência do diagnóstico tardio, uma vez que os sintomas só aparecem em estádios bem avançados. Devido a este panorama há uma grande busca por métodos e, principalmente, biomarcadores de diagnóstico que possam detectar a doença em estádios iniciais e assim aumentar a sobrevida dos pacientes. A discriminação entre tumor e mucosa normal é possível ser feita endoscopicamente, porém, para detecção precoce de tumores esofágico seria importante discriminar mucosa saudável de lesão precursora, como displasia. Uma diferença típica entre tecido normal e displasia é a perda de diferenciação celular, sugerindo que proteínas de diferenciação possam ser um potencial alvo para serem usadas como biomarcadores de detecção precoce em câncer. Citoqueratinas (CKs) e esofagina (SPRR3) são importantes proteínas envolvidas na diferenciação das células no epitélio escamoso. A proteína (SPRR3) vem sendo estudada como um possível biomarcador de detecção de tumores em estádios iniciais de desenvolvimento. Em CE tem sido descrito perda da expressão de SPRR3 quando comparada com a mucosa saudável. Além disso, já foi mostrado que a análise combinada da expressão das duas variantes de SPRR3 (SPRR3-v1 e SPRR3-v2) é capaz de discriminar a mucosa esofágica de indivíduos saudáveis da mucosa adjacente e do tumor com alta sensibilidade e especificidade. Porém, uma associação significativa foi encontrada entre uma menor expressão de SPRR3-v2 e o consumo de álcool. Este dado gerou a hipótese de que o álcool pode levar a carcinogênese por estimular a proliferação e/ou perda de diferenciação do epitélio escamoso e desta forma contribuir para o surgimento do tumor. Para testar esta hipótese, foi realizado um modelo experimental utilizando camundongos BABL/c que receberam diariamente etanol em diferentes concentrações por diferentes intervalos de tempo. Foram analisados critérios de toxicidade dos animais e critérios para avaliação histopátológica no tecido esofágico. Além disso, foi analisado o perfil de expressão de proteínas envolvidas em diferenciação e proliferação celular que pudessem sugerir alterações no epitélio esofágico induzidas pelo etanol, sendo estas SPRR3, CK5/8 e CK14 e Ki67. Inflamação foi a única alteração histológica encontrada, porém ocorreu de forma aleatória, não podendo, portanto, ser associada ao etanol. Alteração no padrão de expressão das proteínas analisadas foi encontrada em regiões inflamadas. Porém, a maioria das amostras não apresentou alterações histopatológicas, nem tampouco alteração de expressão das proteínas, sugerindo que em epitélio esofágico de camundongos BALB/c o etanol não é capaz de induzir isoladamente alteração na proliferação e perda de diferenciação celular.

Esophageal cancer (EC) is one of the ten most common and aggressive cancers worldwide and the developing countries, including Brazil, are among the most incident regions . Despite recent advances in anticancer therapies, less than 10% of the patients with this disease have a survival rate higher than five years after diagnosis and this is a consequence of late diagnosis, since the symptoms only appear in advanced stages. Because of this background there is a big search for methods and diagnostic biomarkers that enable the detection of the disease in early stages and thus increase patient survival. The discrimination between tumor and normal mucosa can be done endoscopically, however, for early detection of esophageal tumors it would be important to discriminate healthy mucosa from precursor lesions, such as dysplasia. A typical difference between normal tissue and dysplasia is the loss of cellular differentiation, suggesting that differentiation markers may be potential targets to be used as biomarkers for cancer early detection. Cytokeratins (CK) and esophagin (SPRR3) are involved in cell differentiation in squamous epithelium. SPRR3 has been studied as a potential biomarker for the detection of tumors in their initial stages of development. In CE it has been described a loss of SPRR3 expression compared to healthy mucosa. Furthermore, it has been shown that the combined analysis of the expression of the two variants of SPRR3 (SPRR3-v1 and SPRR3- v2) is able to discriminate the esophageal mucosa from healthy individuals from the tumors and adjacent mucosa from patients with high sensitivity and specificity. Besides, a significant association was found between lower expression of SPRR3-v2 and alcohol consumption. This finding led to the hypothesis that alcohol can lead to carcinogenesis by stimulating proliferation and/or differentiation loss of squamous epithelium and thereby contribute to the tumor development . To test this hypothesis we conducted an experimental model using BALB/c mice treated daily with ethanol at different concentrations for different time intervals. We analyzed animal toxicity and pathological alterations in the esophageal epithelium. Furthermore, we analyzed the expression profile of proteins involved in cellular differentiation and proliferation that could suggest changes in the esophageal epithelium induced by ethanol, which were SPRR3, CK5/8 and CK14 and Ki67. Inflammation was the only histological abnormality found, however, occurred randomly and cant therefore be associated with ethanol. Changes in the expression pattern of the proteins analyzed were found in inflamed areas. However, most of the samples showed no histological changes nor alterations in protein expression, suggesting that in the esophageal epithelium of BALB/c ethanol is not capable of inducing proliferation and/or loss of cell differentiation.