"Nicotiana tabacum" L. cv Xanthi como sistema heterólogo para la producción de lactógeno placentario humano (hPL)

152 p. : il., col.

El lactógeno placentario humano (hPL) es una hormona polipeptídica que forma parte de la pequeña lista de factores del crecimiento capaces de tratar la diabetes tipo 1 mediante el transplante de islotes humanos. Esta hormona tiene la capacidad de mejorar la supervivencia de los islotes humanos antes y/o después de su transplante. En este trabajo se aborda la producción de hPL en sistemas heterólogos vegetales basados en Nicotiana tabacum cv Xanthi. El cDNA del hPL ha sido introducido en el genoma vegetal del tabaco mediante Agrobacterium tumefaciens, portando los vectores de expresión pNEKhPL1 y pNEKhPL2. La actividad transcripcional se ha confirmado mediante PCR en tiempo real, y los niveles de producción de hPL en plantas transgénicas han alcanzado el 1% de la cantidad de proteína total soluble (PTS). Tras purificar la proteína mediante cromatografía de afinidad a iones metálicos, se ha testado su actividad biológica. Los ensayos in vitro de proliferación y señalización intracelular han demostrado que la proteína producida en plantas mantiene su actividad intacta, y por lo tanto, que las plantas son capaces de producir la hormona funcional. En este trabajo también se han caracterizado la estabilidad de la proteína hPL a lo largo del ciclo de vida del tabaco, y su transmisión a la siguiente generación. La cantidad de proteína recombinante en las hojas jóvenes de las plantas cultivadas en el invernadero ha sufrido un 26% de disminución tras 90 días de cultivo, obteniendo el máximo de proteína a los 30 días. La progenie de plantas pNEKhPL2 han alcanzado el 1.1% de la PTS. También se ha analizado la producción de hPL en callos obtenidos a partir de tejido foliar de plantas transgénicas, que se han utilizado para establecer suspensiones celulares. En este sistema se han obtenido 280.5 µg l-1 de hPL total demostrando que tanto las plantas como las suspensiones son sistemas idóneos para producir hPL recombinante