Expressão da região P2 da proteína VP1 de sapovírus para produção de anticorpos para uso diagnóstico


Autoria(s): Silva, Rayane Luzia Viegas da
Data(s)

28/08/2013

28/08/2013

12/11/2012

Resumo

As doenças diarreicas estão entre as principais causadoras de morbidade e mortalidade pelo mundo. Os sapovírus têm sido descrito como uma causa comum de epidemias gastroentestinais, porém, há falta de informação sobre a prevalência desses vírus nos países em desenvolvimento, uma vez que não existe um método que possibilite a detecção em rotina laboratorial. Este trabalho tem por finalidade produzir anticorpos policlonais contra sapovírus, para o desenvolvimento de estratégias de detecção, tornando-se uma ferramenta útil na rotina laboratorial, além de permitir uma melhor compreensão epidemiológica, visto que, no Brasil há escassez de relatos da circulação do sapovírus. A partir de um sapovírus isolado no Distrito Federal foi realizada clonagem molecular utilizando a região do gene P2 de capsídeo no vetor pENTR 2B em células de E. coli cepa DH5-α, seguida de subclonagem no vetor pDEST 17 em E. coli cepa DH5-α, expressão da proteína em E. coli cepa BL21 AI, purificação da proteína utilizando uma coluna de Ni-NTA que possui a afinidade a proteína contendo His-Tag e inoculação em ratos. A proteína expressa possuía tamanho de 22kDa e foi confirmada através de Western Blotting utilizando anticorpo contra a região His-Tag. A obtenção e inoculação dessa proteína foi um grande avanço para a produção de anticorpos. Esses anticorpos serão úteis para o desenvolvimento de um kit diagnóstico baseado em ELISA.

Diarrhoeal diseases are among the leading causes of morbidity and mortality worldwide. The sapovirus have been described as a common cause of epidemic gastrointestinal diseases however, there is a lack of information on the prevalence of these viruses in developing countries, since there is no method which permits the routine detection in laboratory. This work aims to produce polyclonal antibodies against sapovirus, to develop strategies for detection, making it an useful tool in laboratory, and allows a better epidemiological understanding, because in Brazil there are no reports of sapovirus circulation. From a sapovirus isolated in the Federal District, molecular cloning was performed using the P2 region of capsid gene in the vector pENTR2B of E. coli DH5-α strain, followed by subcloning into the vector pDEST17 in E.coli DH5-α strain, express the protein in E.coli BL21AI strain. The protein purification was performed using a Ni-NTA column that has affinity by the protein containing His-Tag. This protein was inoculated in mice for antibody production. The expressed protein had the expected size of 22kD and its identity was confirmed by Western Blotting using antibodies against His-tag region. The acquisition and inoculation of this protein was a major breakthrough for the production of antibodies. These antibodies will be useful for developing a diagnostic kit based on ELISA.

Biomedicina

Formato

Texto

Identificador

SILVA, Rayane Luzia Viegas da. Expressão da região P2 da proteína VP1 de sapovírus para produção de anticorpos para uso diagnóstico. 2012. 44 f. Monografia (Graduação em Biomedicina) – Universidade Católica de Brasília, Brasília, 2013.

http://repositorio.ucb.br/jspui/handle/10869/1496

Idioma(s)

pt_BR

Publicador

Universidade Católica de Brasília

Direitos

Acesso livre

Palavras-Chave #Gastroenterite #Sapovírus #Proteína #Anticorpos #Biomedicina
Tipo

Monografia